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目前，沙門菌的檢測主要還是采用傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)方法，通過前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化試驗以及血清學(xué)鑒定的步驟一步一步進(jìn)行檢測，工作量大且耗時長。PCR及Real Time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)雖然具有快速、簡便等大量優(yōu)點(diǎn)，卻較少應(yīng)用，主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術(shù)并不能區(qū)分細(xì)菌的死活細(xì)胞，樣品中存在的死細(xì)胞可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。本課題將EMA對死活細(xì)胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結(jié)合，有效克服了DNA分子檢測手段不能鑒別死活細(xì)胞的弊端，在實現(xiàn)檢測的快速、簡便的同時大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。確證了EMA-Real Time PCR可實現(xiàn)實際樣品中沙門菌活細(xì)胞的快速測定，可將EMA-Real Time PCR推廣到實際檢測工作中，如此便可大大縮短檢測所需的時間，節(jié)省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應(yīng)用前景。 社會效益：EMA-Real Time PCR可用于實際樣品中沙門菌活細(xì)胞的快速檢測，建立一種快速檢測病原菌的新方法體系，用于實際的檢測工作中，如此不僅可以減少食品安全日常監(jiān)測的工作量，更重要的是，在突發(fā)性食物中毒事件中，大大縮短了病原菌檢測所需時間，提高了反應(yīng)效率，為突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的解決提供更好的技術(shù)平臺。

胞內(nèi)寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)，建立長期有效的免疫保護(hù)記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構(gòu)建通用平臺，該平臺具有以下優(yōu)勢：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達(dá)穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細(xì)菌基因組，永遠(yuǎn)不會丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會給環(huán)境和公共健康帶來危害。本平臺技術(shù)目前已獲得授權(quán)專利，成果屬于國際先進(jìn)水平，已在結(jié)核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應(yīng)用。該平臺還可應(yīng)用于腫瘤治療性疫苗及其他預(yù)防病毒和慢性細(xì)菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構(gòu)建平臺。

（一）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌NJYH63305是團(tuán)隊自行篩選的有益芽孢桿菌，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品保健、飼料等領(lǐng)域。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，是一種集抑菌、殺蟲、促生于一體的環(huán)境友好型高效生防制劑，對茶輪斑病菌、黃瓜枯萎病菌、立枯絲核菌、煙草赤星病菌、茶云紋葉枯病菌、小麥全蝕病菌、小麥紋枯病、尖鐮孢菌、鐮刀菌、終極腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有較強(qiáng)抑制作用。在醫(yī)藥領(lǐng)域，可調(diào)節(jié)人體腸道微生態(tài)平衡，適于治療急慢性痢疾、腸炎、腹瀉、嬰幼兒腹瀉引起的腸功能紊亂等；在食品保健領(lǐng)域，可作為食品添加劑，長期服用能促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，減少腸道疾病的發(fā)生，提高免疫能力、增強(qiáng)抗病能力。 1、蠟樣芽孢桿菌國內(nèi)外研究進(jìn)展目前，國內(nèi)外蠟狀芽孢桿菌研究大多處于實驗室內(nèi)研究階段，其商品化并應(yīng)用于農(nóng)業(yè)防治的實例較少。國內(nèi)市場上蠟樣芽孢桿菌農(nóng)用制劑大部分為復(fù)配試劑，同時其大規(guī)模培養(yǎng)過程中也存在不少問題，如發(fā)酵放大過程信息采集困難、制劑有效期不長、產(chǎn)品貨架期短等，這些問題的深入研究對解決蠟樣芽孢桿菌高密度培養(yǎng)瓶頸、降低蠟樣芽孢桿菌生產(chǎn)成本、促進(jìn)細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)領(lǐng)域重大突破具有重要意義。2、本課題組技術(shù)優(yōu)勢（1）團(tuán)隊以項目為紐帶，建立了蠟樣芽孢桿菌在線監(jiān)控的高密度培養(yǎng)與多階段發(fā)酵集成技術(shù)，在1000L發(fā)酵罐上蠟樣芽孢桿菌活菌數(shù)高達(dá)800億個/g, 比初始培養(yǎng)提高了230%，達(dá)國際領(lǐng)先水平；（2）篩選的芽孢保護(hù)劑，可提高蠟樣芽孢桿菌活性，延長半衰期40％以上；（3）協(xié)同江蘇省農(nóng)科院及南京農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站進(jìn)行綠色防控技術(shù)推廣，于江蘇浦口林大蔬菜基地、江寧區(qū)湖熟街道設(shè)施蔬菜基地、溧水傅家邊茶廠等地建立2800畝示范區(qū)，重點(diǎn)試驗核心區(qū)460畝。推廣示范區(qū)內(nèi)，蠟樣芽孢桿菌對水稻紋枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率達(dá)51.8％～85.9％，與蘇云金芽孢桿菌（Bt）進(jìn)行增效試驗，小菜蛾殺滅率提高29%，降低化學(xué)農(nóng)藥使用量50％以上，農(nóng)藥殘留量低于國家無公害農(nóng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)；（4）目前已在國內(nèi)外重要期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文10余篇，出版專著《高效有益微生態(tài)制劑開發(fā)與利用——蠟樣芽孢桿菌》，申請國家發(fā)明專利4項，授權(quán)3項，其中3項（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百藥業(yè)有限公司成功實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。（二）凝結(jié)芽孢桿菌團(tuán)隊自行篩選獲得一株益生凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點(diǎn)。凝結(jié)芽孢桿菌為兼性厭氧菌，進(jìn)入腸道后會消耗游離氧，有利于厭氧微生物乳酸菌和雙歧桿菌的生長，多用于調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)菌群平衡，團(tuán)隊自主知識產(chǎn)權(quán)的凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005對甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很強(qiáng)的防治效果，可進(jìn)行新型高效生物農(nóng)藥的開發(fā)。

本實用新型涉及一種用于刺吸式小型昆蟲內(nèi)共生菌滅活的飼喂裝置。該裝置包括自上而下依次設(shè)置的蓋體結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)容器和通氣結(jié)構(gòu)；所述蓋體結(jié)構(gòu)包括頂蓋和設(shè)置在所述頂蓋的下側(cè)面的飼喂液腔；飼喂液腔的底面為PTFE濾膜；所述培養(yǎng)容器為兩端開口的圓筒形結(jié)構(gòu)。本實用新型所述用于刺吸式小型昆蟲內(nèi)共生菌滅活的飼喂裝置，結(jié)構(gòu)簡單，成本低廉，易于操作，同時有效降低刺吸式昆蟲的死亡率。

活載體疫苗是指對細(xì)菌、病毒、真菌等微生物進(jìn)行基因改造，保留其基本入侵宿主細(xì)胞引起免疫反應(yīng)的能力，降低其對宿主造成危害毒力，之后通過外源插入疫苗靶點(diǎn)基因等方法建立起來的一種新型疫苗。近年來團(tuán)隊在對常見腸道致病菌致病機(jī)理研究的基礎(chǔ)上，篩選了單增李斯特菌做為載體菌，對其關(guān)鍵毒力基因進(jìn)行敲除構(gòu)建穩(wěn)定減毒突變株用來表達(dá)外源基因。目前團(tuán)隊已構(gòu)建了雙基因敲除株疫苗載體、半致死載體等活載體疫苗運(yùn)載系統(tǒng)，并對其進(jìn)行抗原遞呈、免疫機(jī)理等進(jìn)行了初步研究發(fā)現(xiàn)，該類疫苗載體對免疫因子具有強(qiáng)烈的激活效應(yīng)，更為重要的是該類活載體

真核細(xì)胞具有復(fù)雜而高度有序的空間結(jié)構(gòu)，研究生物大分子的亞細(xì)胞定位，對于闡明其生物學(xué)功能有著重要意義。核酸分子在細(xì)胞中的特異性分布直接影響基因表達(dá)的效率，在蛋白質(zhì)翻譯調(diào)控、學(xué)習(xí)與記憶形成等一系列生物學(xué)過程中扮演了重要角色。針對亞細(xì)胞區(qū)域中RNA組份的研究，傳統(tǒng)手段依賴于化學(xué)交聯(lián)、免疫沉淀、離心分離等技術(shù)，不但需要預(yù)先破壞細(xì)胞的天然結(jié)構(gòu)，而且還局限于少數(shù)能夠被機(jī)械分離的亞細(xì)胞區(qū)域，缺乏普適性。 本研究提出“鄰近核酸標(biāo)記”的策略。該策略的核心是在活細(xì)胞中利用酶促反應(yīng)形成大量高活性的自由基，與酶鄰近的核酸分子發(fā)生共價加成反應(yīng)，從而實現(xiàn)空間特異性標(biāo)記。從工程改造的過氧化物酶APEX2出發(fā)，鄒鵬課題組首先設(shè)計并合成了十余種與生物素偶聯(lián)的酶底物，并從中發(fā)現(xiàn)生物素-苯胺探針的核酸標(biāo)記活性最高。他們進(jìn)一步以線粒體、核纖層和核仁等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)為例，建立了在活細(xì)胞中開展鄰近核酸標(biāo)記的方法，并通過定量PCR與高通量測序分析證實了標(biāo)記方法具有良好的空間特異性。鄰近核酸標(biāo)記技術(shù)操作簡單、具有普適性，為日后研究核酸的亞細(xì)胞定位與功能關(guān)系提供了必要的工具。

??????? 非損傷微測技術(shù)（Non-invasive Micro-test Technology，NMT）源于美國MBL實驗室（54位諾貝爾獎得主的搖籃），由神經(jīng)學(xué)家Lionel F. Jaffe（美國揚(yáng)格公司創(chuàng)始人之一）于1974年發(fā)明，2001年，美國揚(yáng)格公司正式推出現(xiàn)代NMT。NMT是一種研究活體材料的底層核心技術(shù)，研究人員基于NMT能夠建立自己獨(dú)有的Me-Only 研究平臺，從而獲得極具創(chuàng)新的研究成果。 ??????? NMT可在不接觸、不損傷樣品的情況下，檢測分子/離子進(jìn)出生物活體的流速（流動速率和方向），可測樣品種類繁多，小到菌、單細(xì)胞、液泡，大到組織、器官、整體都可檢測。基于NMT商業(yè)化的設(shè)備統(tǒng)稱為非損傷微測系統(tǒng)。 ??????? 揚(yáng)格/旭月的非損傷微測系統(tǒng)包含BIO系列、CONFLUX系列（共聚焦/熒光NMT）、NMT100系列、NMT200系列、NMT100S系列、NMT200S系列、NMT150系列、NMT活體工作站系列、NMT Physiolyzer?系列等，已發(fā)展至第七代自動化智能產(chǎn)品。揚(yáng)格/旭月的NMT系統(tǒng)全部采用從美國揚(yáng)格（旭月北京）研發(fā)中心自主研發(fā)的imFluxes智能操作軟件，將十余年的NMT應(yīng)用大數(shù)據(jù)與設(shè)備實現(xiàn)完美結(jié)合，并且在產(chǎn)品一體化、自動化、智能化、擴(kuò)展升級等諸多方面都有大幅提升。 ??????? 揚(yáng)格/旭月已取得基于NMT的數(shù)十項專利及軟件著作權(quán)，擁有完善的專利保護(hù)體系，所有產(chǎn)品全部通過中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證和ISO9001質(zhì)量體系認(rèn)證。揚(yáng)格/旭月所銷售的NMT專用耗材，已通過中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證，所有耗材是揚(yáng)格/旭月研發(fā)中心結(jié)合十余年的經(jīng)驗、摸索并自主研發(fā)生產(chǎn)的。NMT專用耗材較傳統(tǒng)的通用型耗材保質(zhì)期更長，性能更穩(wěn)定、可靠，所有對外銷售的耗材全部經(jīng)過嚴(yán)格的生產(chǎn)、檢驗流程。 ??????? 揚(yáng)格/旭月的NMT研究平臺已經(jīng)幫助國內(nèi)外科研單位取得近百項各類專利，以及包含Nature、Cell在內(nèi)的500多篇論文。同時，已銷往歐洲的瑞士蘇黎世大學(xué)（擁有包括愛因斯坦在內(nèi)10余位諾貝爾獎得主），以及中國科學(xué)院、中國林科院、中國農(nóng)科院、農(nóng)業(yè)部下屬的眾多科研院所與高校，以及北大、上海交大等知名高校。 名稱：NMT活細(xì)胞工作站 代數(shù)：第七代 品牌：旭月 產(chǎn)地：中國 已獲得認(rèn)證：中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證，ISO9001國際質(zhì)量體系認(rèn)證 簡介：NMT活細(xì)胞工作站是一款針對活細(xì)胞生理功能研究而特別設(shè)計的活體生理功能檢測平臺，可在細(xì)胞的正常培養(yǎng)/生長環(huán)境中，檢測進(jìn)出細(xì)胞內(nèi)外的分子、離子的流速，反映細(xì)胞的實時生理狀態(tài)，分辨率高達(dá)10-12 mol級別。能滿足質(zhì)膜生理功能、神經(jīng)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等方向的臨床與基礎(chǔ)研究需求。 1 活體、原位、非損傷測量 對整體或分離后的樣品不造成損傷，獲取正常生理狀態(tài)下的信息。 2 無需標(biāo)記 預(yù)先知道測定的是何種指標(biāo)，無需用放射性、化學(xué)或藥理學(xué)等標(biāo)記方法，安全且環(huán)保。 3 不用提取樣品 可直接檢測，不需要研磨等傳統(tǒng)的提取方法。 4 實時、動態(tài)檢測 動態(tài)實時（最短在6秒左右）檢測和獲取數(shù)據(jù)。 5 長時間持續(xù)檢測 可進(jìn)行長達(dá)8個小時以上的實時和動態(tài)監(jiān)測。 6 可測指標(biāo) 采購相對應(yīng)耗材后可單獨(dú)檢測Ca2+、Cl-濃度和流速。 預(yù)留指標(biāo)檢測升級端口，可升級指標(biāo)包含：IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、Ca2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+的濃度和流速檢測。 預(yù)留雙指標(biāo)檢測升級端口，升級后可單獨(dú)檢測一種離子或分子，也可同時檢測兩種離子或一種離子與一種分子的濃度和流速，用于離子/分子相關(guān)性研究及更前沿的科研探索。 7 可測樣品種類繁多 整體、器官、組織等都可以檢測（理論值：5μm-10cm均可）。 8 自動化操作 X、Y、Z方向自動/手動操控傳感器移動。 9 數(shù)據(jù)采集方式 X方向一維數(shù)據(jù)采集。 型號 功能 可升級功能 NMT-LCP 1.標(biāo)配兩種指標(biāo)：Ca2+、Cl-。 2.操作方式：三維自動。 3.檢測樣品：可檢測樣品尺寸為5μm-10cm。 4.數(shù)據(jù)：1D。可直接檢測、輸出流速和濃度數(shù)據(jù)。 5.檢測方式：單傳感器檢測 6.異常報警：有 1.可升級指標(biāo)：膜電勢、IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+。 2.可擴(kuò)展：未來新研發(fā)指標(biāo)可擴(kuò)展升級。 3.可升級檢測方式：單/雙傳感器檢測可選。 4.數(shù)據(jù)：1D/3D可選。可直接檢測、輸出流速和濃度數(shù)據(jù)。 ? ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ? ??

于生物制藥生產(chǎn)廢水中通常含有病原性微生物，殺死病原體后才能排放到污水處理系統(tǒng)中，沃恩專門研制出一套生物滅活處理系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過持續(xù)穩(wěn)定的高溫使細(xì)菌的菌體變性或凝固酶失去活性而使細(xì)菌死亡，病菌在高溫下DNA、RN的化學(xué)吸收熱量導(dǎo)致鍵斷裂，從而滅活。本系統(tǒng)采用序批次處理方式，配有一個收集罐和兩個或兩個以上的滅活罐，通過間歇式方式運(yùn)行，確保使用過程中的節(jié)能環(huán)保，系統(tǒng)可靠性高；另外整個系統(tǒng)采用智能化控制，能夠?qū)崿F(xiàn)無人值守，全自動運(yùn)行，并已在實際項目中取得顯著效果。

1 成果簡介現(xiàn)代社會人們生活節(jié)奏加快、缺乏鍛煉、工作學(xué)習(xí)壓力加大，使人們不自覺地進(jìn)入“亞健康”狀態(tài)，特別是隨著步入老年社會，人們越來越關(guān)注身體的健康，推行健康概念服務(wù)可以滿足大多數(shù)人群的需求。 飛活網(wǎng)（ fihuo.com） 通過結(jié)合便攜的傳感器腕帶、智能手機(jī)和后臺海量數(shù)據(jù)處理平臺，可以給人們展示長期的基本健康數(shù)據(jù)和環(huán)境數(shù)據(jù)，并用于比較和分析。關(guān)注家人和朋友的健康不再是一個夢想，可以實現(xiàn)在線的健康數(shù)據(jù)瀏覽和監(jiān)控。 飛活網(wǎng)具備社交網(wǎng)絡(luò)的基本交互功能， 可以輕松獲得最新和最熱的健康資訊；可以邀請和加入朋友的健康生活圈子，開始健康的生活方式； 可以定制和發(fā)布個人的健康計劃，并記錄健康日記；可以長期保存，瀏覽和分析個人健康數(shù)據(jù)； 可以發(fā)布和參與健康測試，提高對健康生活的認(rèn)識； 可以提交和回答健康問題，獲得貼心的健康問題答案。 飛活網(wǎng)還研制了計步器和健康腕帶智能設(shè)備，以及相關(guān)的智能手機(jī)應(yīng)用和微博應(yīng)用，可以實現(xiàn)隨時隨地的健康數(shù)據(jù)采集、分析與共享，比如步數(shù)、距離、路線、卡路里、 脈率、血氧和營養(yǎng)等數(shù)據(jù)。基于健康傳感器網(wǎng)絡(luò)和數(shù)據(jù)處理平臺， 可以實現(xiàn)具有特色的健康主題服務(wù)。 下圖展示了傳感器設(shè)備、智能手機(jī)應(yīng)用和飛活網(wǎng)服務(wù)的連接關(guān)系。 2013_18_12 應(yīng)用說明2012 年 8 月，飛活網(wǎng)服務(wù)網(wǎng)站開始上線試運(yùn)行，同時發(fā)布了 Android 平臺的手機(jī)健康應(yīng)用供用戶免費(fèi)下載，用戶可以使用手機(jī)健康應(yīng)用不斷收集日常的運(yùn)動和健康數(shù)據(jù)，并定時上傳到飛活網(wǎng)服務(wù)器上進(jìn)行保存和處理，從而實現(xiàn)長期的健康數(shù)據(jù)瀏覽、管理和分析，不僅可以幫助用戶建立個人健康檔案，還可以進(jìn)行健康指導(dǎo)。此外， 飛活網(wǎng)研制的計步器和健康腕帶智能設(shè)備非常方便攜帶和使用，不僅能耗較低，而且可以緩存多天的數(shù)據(jù)并能通過藍(lán)牙上傳到手機(jī)，然后通過無線上傳至服務(wù)器。3 效益分析目前移動健康領(lǐng)域發(fā)展迅速，國內(nèi)外都涌現(xiàn)出一些優(yōu)秀的初創(chuàng)公司，各個投資機(jī)構(gòu)都密切關(guān)注健康醫(yī)療領(lǐng)域。 飛活網(wǎng)的核心競爭力是為用戶提供長期的健康數(shù)據(jù)采集、管理、分析和指導(dǎo)等服務(wù)。 而且， 面向不同人群開發(fā)的擴(kuò)展傳感器設(shè)備還可以擴(kuò)展到家庭和社區(qū)等更廣泛的領(lǐng)域。飛活網(wǎng)通過初步建立從個人健康數(shù)據(jù)產(chǎn)生、收集、存儲到分析和指導(dǎo)的路徑，具有明顯的社會和經(jīng)濟(jì)效益。通過結(jié)合智能設(shè)備的制造和營銷，以及增值的飛活網(wǎng)服務(wù)可以吸引越來越多的人群參與其中，并享受健康生活帶來的幸福感和成就感。