目前,沙門菌的檢測主要還是采用傳統的細菌學方法,通過前增菌、選擇性增菌、分離培養、生化試驗以及血清學鑒定的步驟一步一步進行檢測,工作量大且耗時長。PCR及Real Time PCR等分子生物學技術雖然具有快速、簡便等大量優點,卻較少應用,主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術并不能區分細菌的死活細胞,樣品中存在的死細胞可能導致假陽性結果。本課題將EMA對死活細胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結合,有效克服了DNA分子檢測手段不能鑒別死活細胞的弊端,在實現檢測的快速、簡便的同時大大提高了結果的準確性。確證了EMA-Real Time PCR可實現實際樣品中沙門菌活細胞的快速測定,可將EMA-Real Time PCR推廣到實際檢測工作中,如此便可大大縮短檢測所需的時間,節省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應用前景。 社會效益:EMA-Real Time PCR可用于實際樣品中沙門菌活細胞的快速檢測,建立一種快速檢測病原菌的新方法體系,用于實際的檢測工作中,如此不僅可以減少食品安全日常監測的工作量,更重要的是,在突發性食物中毒事件中,大大縮短了病原菌檢測所需時間,提高了反應效率,為突發性公共衛生事件的解決提供更好的技術平臺。
節約時間(國家標準方法程序繁瑣,一般需要4-7天才能完成檢測,無法滿足突發公共衛生事件應急處理快速反應的需求),應急快速處理。 國內先進。
本研究將染料EMA與與Real Time PCR技術相結合,建立一種適用于沙門菌活細胞檢測的EMA-Real Time PCR新方法。通過對大量不同種類樣品的分析,可驗證所確立方法實際應用的可行。