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本成果獲得 2015 年青島市科技進(jìn)步獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)。水貂巴氏桿菌病 蜂膠滅活苗，在傳統(tǒng)的水貂巴氏桿菌滅活疫苗的基礎(chǔ)上加入蜂膠，加入蜂膠后 的疫苗在使用上更加安全，在免疫效果上更加好，在同類滅活疫苗的研制上處 于領(lǐng)先水平，此項(xiàng)目在其他細(xì)菌疫苗研制上也提供了有價(jià)值的借鑒作用。本成青島農(nóng)業(yè)大學(xué)科技成果介紹 2017 －35－ 果主要應(yīng)用于水貂的巴氏桿菌病的預(yù)防，投入生產(chǎn)使用后將高效安全的預(yù)防水 貂巴氏桿菌病的發(fā)生，為廣大水貂養(yǎng)殖戶提供高的經(jīng)濟(jì)保障，因?yàn)樗醢褪蠗U 菌病蜂膠滅活苗在生產(chǎn)上操作相對(duì)簡(jiǎn)單便于大規(guī)模生產(chǎn)，對(duì)生產(chǎn)商來(lái)講有著較 其他疫苗所沒(méi)有的優(yōu)勢(shì)。 生產(chǎn)條件及市場(chǎng)預(yù)期：水貂巴氏桿菌病是水貂的常發(fā)病，主要影響水貂的 呼吸系統(tǒng)引起水貂的肺炎是其主要的特征，發(fā)病率高致死率也高對(duì)水貂的養(yǎng)殖 影響嚴(yán)重。水貂巴氏桿菌病蜂膠滅活苗，能夠有效預(yù)防此病，因其操作簡(jiǎn)單因 而能夠及時(shí)預(yù)防和治療水貂巴氏桿菌病。有肺炎的病貂會(huì)嚴(yán)重影響貂皮的質(zhì)量， 所以水貂巴氏桿菌病蜂膠滅活疫苗在預(yù)防巴氏桿菌病保障養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益的同 時(shí)，也為社會(huì)提供了優(yōu)質(zhì)的貂皮，所以此疫苗有著廣闊的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。 

未經(jīng)殺菌的桶裝啤酒和扎啤在夏天的運(yùn)輸、銷售過(guò)程中其質(zhì)量難以保證。啤酒瞬時(shí)巴氏殺菌機(jī)是保證啤酒保質(zhì)期的必備設(shè)備。通過(guò)巴式瞬時(shí)殺菌，可將生啤酒在夏天的保質(zhì)期提高到3~5天，有利于中長(zhǎng)途運(yùn)輸和銷售。殺菌單位達(dá)到25PU。由于對(duì)啤酒的熱作用時(shí)間短，經(jīng)過(guò)瞬時(shí)殺菌的啤酒可保持生啤的原有風(fēng)味。設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)格為同類進(jìn)口產(chǎn)品價(jià)格的1/5左右。目前已完成中試，可在生產(chǎn)中應(yīng)用。同一生產(chǎn)能力的殺菌機(jī)包括三種型號(hào)：手動(dòng)控制型、儀表自動(dòng)控制型和計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制型。

目前，沙門(mén)菌的檢測(cè)主要還是采用傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)方法，通過(guò)前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)以及血清學(xué)鑒定的步驟一步一步進(jìn)行檢測(cè)，工作量大且耗時(shí)長(zhǎng)。PCR及Real Time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)雖然具有快速、簡(jiǎn)便等大量?jī)?yōu)點(diǎn)，卻較少應(yīng)用，主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術(shù)并不能區(qū)分細(xì)菌的死活細(xì)胞，樣品中存在的死細(xì)胞可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。本課題將EMA對(duì)死活細(xì)胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結(jié)合，有效克服了DNA分子檢測(cè)手段不能鑒別死活細(xì)胞的弊端，在實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的快速、簡(jiǎn)便的同時(shí)大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。確證了EMA-Real Time PCR可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中沙門(mén)菌活細(xì)胞的快速測(cè)定，可將EMA-Real Time PCR推廣到實(shí)際檢測(cè)工作中，如此便可大大縮短檢測(cè)所需的時(shí)間，節(jié)省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應(yīng)用前景。 社會(huì)效益：EMA-Real Time PCR可用于實(shí)際樣品中沙門(mén)菌活細(xì)胞的快速檢測(cè)，建立一種快速檢測(cè)病原菌的新方法體系，用于實(shí)際的檢測(cè)工作中，如此不僅可以減少食品安全日常監(jiān)測(cè)的工作量，更重要的是，在突發(fā)性食物中毒事件中，大大縮短了病原菌檢測(cè)所需時(shí)間，提高了反應(yīng)效率，為突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的解決提供更好的技術(shù)平臺(tái)。

胞內(nèi)寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過(guò)MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)，建立長(zhǎng)期有效的免疫保護(hù)記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項(xiàng)目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構(gòu)建通用平臺(tái)，該平臺(tái)具有以下優(yōu)勢(shì)：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達(dá)穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細(xì)菌基因組，永遠(yuǎn)不會(huì)丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號(hào)肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對(duì)環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會(huì)給環(huán)境和公共健康帶來(lái)危害。本平臺(tái)技術(shù)目前已獲得授權(quán)專利，成果屬于國(guó)際先進(jìn)水平，已在結(jié)核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應(yīng)用。該平臺(tái)還可應(yīng)用于腫瘤治療性疫苗及其他預(yù)防病毒和慢性細(xì)菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構(gòu)建平臺(tái)。

（一）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌NJYH63305是團(tuán)隊(duì)自行篩選的有益芽孢桿菌，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品保健、飼料等領(lǐng)域。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，是一種集抑菌、殺蟲(chóng)、促生于一體的環(huán)境友好型高效生防制劑，對(duì)茶輪斑病菌、黃瓜枯萎病菌、立枯絲核菌、煙草赤星病菌、茶云紋葉枯病菌、小麥全蝕病菌、小麥紋枯病、尖鐮孢菌、鐮刀菌、終極腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有較強(qiáng)抑制作用。在醫(yī)藥領(lǐng)域，可調(diào)節(jié)人體腸道微生態(tài)平衡，適于治療急慢性痢疾、腸炎、腹瀉、嬰幼兒腹瀉引起的腸功能紊亂等；在食品保健領(lǐng)域，可作為食品添加劑，長(zhǎng)期服用能促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，減少腸道疾病的發(fā)生，提高免疫能力、增強(qiáng)抗病能力。 1、蠟樣芽孢桿菌國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展目前，國(guó)內(nèi)外蠟狀芽孢桿菌研究大多處于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)研究階段，其商品化并應(yīng)用于農(nóng)業(yè)防治的實(shí)例較少。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上蠟樣芽孢桿菌農(nóng)用制劑大部分為復(fù)配試劑，同時(shí)其大規(guī)模培養(yǎng)過(guò)程中也存在不少問(wèn)題，如發(fā)酵放大過(guò)程信息采集困難、制劑有效期不長(zhǎng)、產(chǎn)品貨架期短等，這些問(wèn)題的深入研究對(duì)解決蠟樣芽孢桿菌高密度培養(yǎng)瓶頸、降低蠟樣芽孢桿菌生產(chǎn)成本、促進(jìn)細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)領(lǐng)域重大突破具有重要意義。2、本課題組技術(shù)優(yōu)勢(shì)（1）團(tuán)隊(duì)以項(xiàng)目為紐帶，建立了蠟樣芽孢桿菌在線監(jiān)控的高密度培養(yǎng)與多階段發(fā)酵集成技術(shù)，在1000L發(fā)酵罐上蠟樣芽孢桿菌活菌數(shù)高達(dá)800億個(gè)/g, 比初始培養(yǎng)提高了230%，達(dá)國(guó)際領(lǐng)先水平；（2）篩選的芽孢保護(hù)劑，可提高蠟樣芽孢桿菌活性，延長(zhǎng)半衰期40％以上；（3）協(xié)同江蘇省農(nóng)科院及南京農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站進(jìn)行綠色防控技術(shù)推廣，于江蘇浦口林大蔬菜基地、江寧區(qū)湖熟街道設(shè)施蔬菜基地、溧水傅家邊茶廠等地建立2800畝示范區(qū)，重點(diǎn)試驗(yàn)核心區(qū)460畝。推廣示范區(qū)內(nèi)，蠟樣芽孢桿菌對(duì)水稻紋枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率達(dá)51.8％～85.9％，與蘇云金芽孢桿菌（Bt）進(jìn)行增效試驗(yàn)，小菜蛾殺滅率提高29%，降低化學(xué)農(nóng)藥使用量50％以上，農(nóng)藥殘留量低于國(guó)家無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)；（4）目前已在國(guó)內(nèi)外重要期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文10余篇，出版專著《高效有益微生態(tài)制劑開(kāi)發(fā)與利用——蠟樣芽孢桿菌》，申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利4項(xiàng)，授權(quán)3項(xiàng)，其中3項(xiàng)（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百藥業(yè)有限公司成功實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。（二）凝結(jié)芽孢桿菌團(tuán)隊(duì)自行篩選獲得一株益生凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點(diǎn)。凝結(jié)芽孢桿菌為兼性厭氧菌，進(jìn)入腸道后會(huì)消耗游離氧，有利于厭氧微生物乳酸菌和雙歧桿菌的生長(zhǎng)，多用于調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)菌群平衡，團(tuán)隊(duì)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005對(duì)甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很強(qiáng)的防治效果，可進(jìn)行新型高效生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)。

研發(fā)階段/n一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門(mén)氏菌疫苗及應(yīng)用?！　〕晒?jiǎn)介：沙門(mén)氏菌是一種胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸道桿菌，具有侵襲性。減毒沙門(mén)氏菌為載體的基因工程疫苗具有無(wú)法比擬的優(yōu)越性，口服該種基因工程疫苗可以在激發(fā)產(chǎn)生抗沙門(mén)氏菌免疫應(yīng)答的同時(shí)誘發(fā)特異性針對(duì)外源蛋白的體液和細(xì)胞免疫。豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬呼吸道疾病的高度接觸傳染病，可對(duì)豬場(chǎng)造成巨大的損失。本發(fā)明涉及一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門(mén)氏菌疫苗及應(yīng)用，屬于動(dòng)物細(xì)菌基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具

魏氏梭菌能引起各種動(dòng)物壞死性腸炎、腸毒血癥、人畜創(chuàng)傷性壞 疽以及人類食物中毒，快速、低成本、定量檢測(cè)人體內(nèi)的 α 毒素對(duì)于 預(yù)防和診斷魏氏梭菌感染至關(guān)重要。本項(xiàng)目涉及的魏氏梭菌病及其致 病菌型的膠體硒檢測(cè)試紙能單獨(dú)或同時(shí)完成魏氏梭菌病的早期診斷 和各種致病菌的分型鑒定, 可應(yīng)用于獸醫(yī)臨床、畜牧養(yǎng)殖、食品安全、 公共衛(wèi)生、水質(zhì)監(jiān)測(cè)及相關(guān)領(lǐng)域，具有操作簡(jiǎn)單、敏感特異、攜帶方 便等特點(diǎn)，有廣闊的市場(chǎng)前景與經(jīng)濟(jì)效益潛力。

本實(shí)用新型屬于水產(chǎn)品加工機(jī)械技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水產(chǎn)品微波巴氏循環(huán)殺菌裝置。包括微波源、連接波導(dǎo)、功率分配器、角錐喇叭、介質(zhì)耦合窗和諧振腔腔體；諧振腔腔體的兩端上下兩側(cè)對(duì)稱連接有介質(zhì)耦合窗，諧振腔腔體左端部的介質(zhì)耦合窗左側(cè)上部為進(jìn)料口，右端部的介質(zhì)耦合窗右側(cè)下部為出料口；諧振腔腔體內(nèi)部設(shè)有兩條平行的傳送帶，諧振腔腔體內(nèi)部側(cè)壁、出料口上方、轉(zhuǎn)角輥右側(cè)設(shè)有抓桿，抓桿與液壓桿相連；諧振腔腔體左端底部設(shè)有循環(huán)水進(jìn)口，右端頂部設(shè)有循環(huán)水出口。本裝置通過(guò)將微波殺菌與水浴巴氏殺菌方式相結(jié)合，用循環(huán)水作為加熱殺菌介質(zhì)，減緩微波加熱升溫速度，提高了殺菌后水產(chǎn)品的綜合品質(zhì)。