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基于可切割自聚集標簽的多肽表達純化方法
01. 成果簡介 本項成果提供了一種多肽的合成方法，利用了自聚集短肽誘導目標多肽的聚集，使得生物合成的多肽以沉淀形式保護下來，從而避免降解；然后通過體外切割，獲得目標多肽，優化了多肽合成和分離的工藝，操作簡便且不受多肽的長度限制，有望為多肽藥物的高效制備提供一種解決方案。 具體的，在目標多肽的N端或C端融合一段自聚集短肽，這兩者之間采用一個連接肽將兩者融合。這個連接肽可以是化學切割、酶切割的識別序列或自切割肽（內含肽）。通過分子克隆，將這三段肽（目標肽、連接肽、自聚集短肽）克隆并轉化至表達菌株（如大腸桿菌BL21（DE3））中進行表達。隨后通過離心或過濾收獲菌體，利用高壓、超聲波等技術進行細胞破碎；再通過離心或過濾收集不可溶部分（聚集體）；在簡單洗滌后，根據所選的連接肽的屬性進行切割，如化學切割，蛋白酶切割或誘導自切割；再通過離心或過濾去除不可溶部分，收集上清即可得到粗純多肽產品。如下圖所示： 02. 應用前景 基于本項技術可以合成糖尿病仿制藥利拉魯肽、矮小癥仿制藥生長激素（hGH）等。03. 知識產權 相關成果已授權3項中國發明專利及1項美國專利。04. 團隊介紹 團隊主要研究領域為合成生物學和生物制藥（包括他汀類化學藥物和多肽藥物），負責人林章凜博士為教授、博士生導師，教育部長江學者，廣東省“珠江人才計劃”科技領軍人才。先后承擔973、863、國家重點研發計劃專項、國家自然科學基金等科研項目，發表SCI論文50余篇，申請專利20余項。05. 合作方式 商務合作。06. 聯系方式 [email protected] [email protected]
清華大學
2021-04-13
結合IGF-1C多肽的可注射性水凝膠
本發明涉及一種結合胰島素樣生長因子C結構域多肽(IGF-1C)的殼聚糖水凝膠，其具有良好的細胞相容性和生物活性。這類活性水凝膠具有可注射性，能夠作為載體材料，促進干細胞對組織損傷的治療效果。其為移植干細胞提供適宜的組織再生微環境，從而提高移植干細胞的存活率。增加干細胞在損傷區內的存活及駐留，促進移植細胞存活、增殖，減少凋亡，促進損傷部位血管新生以及功能恢復，進而提高干細胞移植治療組織損傷的治療效果。此外，移植后水凝膠并沒有促進干細胞發生不良分化。
南開大學
2021-04-10
一種基于G蛋白偶聯受體構建的融合多肽
神經遞質作為神經元與神經元及神經元與細胞之間溝通的媒介分子，介導了發育、信息感知，運動及大腦的高級認知功能。隨著生化分離純化技術的發展以及人們對大腦精細結構的進一步了解，現如今已發現有幾十種重要的神經遞質。而神經系統在時間和空間上的高度復雜性對研究特定神經遞質的動態變化及其功能提出了極大的挑戰。本項目成功構建了一系列新型的基因編碼的神經遞質熒光探針，可實現對特定神經遞質動態變化的靈敏檢測。該類熒光探針利用大多數已知的神經遞質所對應的特異性G蛋白偶聯受體（GPCR）與循環重排的熒光蛋白（cpGFP）融合，利用循環重排熒光蛋白的熒光強度變化來指示GPCR的激活，進而反應外源神經遞質的濃度變化（圖一）。我們命名該類熒光探針為GRAB探針，即為GPCR Activation Based Sensor的縮寫。
北京大學
2021-02-01
一種酶法制備有機菜籽多肽的方法
其他成果/n一種酶法制備有機菜籽多肽的方法，包括：菜籽蛋白的制備；將菜籽蛋白與蒸餾水按一定料液比混勻，并進行超聲輔助濕熱處理，得到濕熱菜籽蛋白漿液；向濕熱菜籽蛋白漿液中加入三聚磷酸鈉進行超聲輔助磷酸化處理，得到磷酸化菜籽蛋白漿液；調節磷酸化菜籽蛋白漿液的pH和溫度，并加入堿性蛋白酶進行超聲輔助酶解，得到一次酶解液；調節一次酶解液的pH和溫度，并加入復合風味蛋白酶進行超聲輔助酶解，得到二次酶解液；對二次酶解液進行微波滅酶處理，得到滅酶酶解液，將滅酶酶解液離心得到菜籽多肽清液，再進行冷凍干燥處理，即得成品的有機菜籽多肽。該酶法制備有機菜籽多肽的方法，工藝安全、制備便捷。
武漢輕工大學
2021-04-11
一種牛骨膠原多肽的生產方法
其他成果/n種牛骨膠原多肽的生產方法，包括如下步驟：將牛骨膠原蛋白溶液與磷酸鹽溶液混勻，并加熱一定時間，得到牛骨膠原蛋白漿液；通入交流電流處理一定時間，切斷電源后再通入恒壓反向電流處理一定時間，切斷電源后再通入恒壓正向電流處理一定時間，得到牛骨膠原蛋白混合液；對牛骨膠原蛋白混合液加入一次復合酶進行超聲輔助酶解，得到一次酶解液；再加入二次復合酶進行超聲輔助酶解，得到二次酶解液；再進行微波滅酶處理，將滅酶酶解液靜置冷卻，離心取上清液后再進行冷凍干燥處理，即得成品的牛骨膠原多肽。該牛骨膠原多肽的生產方法，
武漢輕工大學
2021-01-12
一種腫瘤靶向多肽光敏劑鍵合物
本發明公開了一種腫瘤靶向多肽光敏劑鍵合物，屬于生物醫藥領域。所述的腫瘤靶向多肽光敏劑鍵 合物的結構為 A-B-C-D，其中，A 為光動力學治療光敏劑，B 為含正電荷的細胞穿膜肽片段，C 為基質 金屬蛋白酶特異性識別多肽片段，D 為含負電荷的多肽片段。本發明公開的多肽光敏劑鍵合物可以顯著 提高光動力學治療光敏劑在生理條件下的穩定性，極大的減少光動力學
武漢大學
2021-04-14
一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用
本發明提供了一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用,該蛋白是一種具有結合 Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物雙向功能的融合蛋白,可以作為抗癌siRNA的藥物 載體。其中,單鏈片段抗體為Her2-ScFv,多肽為魚精蛋白片段多肽。該單鏈片段抗 體-多肽融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示的序列。本發明構建的Her2單鏈片段抗 體與魚精多肽的融合蛋白具有結合Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物的雙向功能。本 發明的融合蛋白能把抗癌siRNA藥物定向導入目標癌細胞中,開發了非病毒載體工 具,加速RNAi技術應用于臨床。
中山大學
2021-02-01
一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用
項目成果/簡介:本發明提供了一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用,該蛋白是一種具有結合 Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物雙向功能的融合蛋白,可以作為抗癌siRNA的藥物 載體。其中,單鏈片段抗體為Her2-ScFv,多肽為魚精蛋白片段多肽。該單鏈片段抗 體-多肽融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示的序列。本發明構建的Her2單鏈片段抗 體與魚精多肽的融合蛋白具有結合Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物的雙向功能。本 發明的融合蛋白能把抗癌siRNA藥物定向導入目標癌細胞中,開發了非病毒載體工 具,加速RNAi技術應用于臨床。項目階段:成果已轉化
中山大學
2021-04-10
多肽水凝膠在疫苗佐劑和抗體制備方面的應用
多肽水凝膠具有生物相容性高、可降解、具有生物活性等特點和 優點，它在生長因子和藥物的緩控釋、組織工程和再生醫學等領域具 有很高的應用前景。目前有較高轉化前景的項目是多肽水凝膠在疫苗 佐劑和抗體制備方面的應用。癌癥、艾滋病、丙肝等重大疾病疫苗的 研制具有重要的意義。在這些疾病的預防性和治療性疫苗研制中，關 鍵的一環是可激活人體細胞免疫的佐劑的發現。 本項目開發出一種多肽水凝膠，具有極強地激發細胞免疫的功能。 對比于現有的幾種可激活細胞免疫的佐劑（CpG，MPL 等），我們的 水凝膠佐劑具有以下優勢： 1）成本低，1mgCpG 價格為 5000-8000rmb，1mgMPL 價格為 2000- 4000rmb，我們的短肽實驗室合成成本 1g 低于 500rmb； 2）操作簡單，僅需物理混合就可實現與抗原復合； 3）適用于蛋白、短肽、DNA、滅活癌細胞等各類抗原，通用性 高； 4）短肽結構簡單，可大量制備，實驗室一天內一次性即可合成10g 以上該多肽，可用于制備 10000 瓶以上 1mL 的水凝膠（臨床用的 疫苗每次注射量是 0.5-1mL），可以很容易的實現中試級別的化合物 合成及疫苗制備。基于這些優點，該佐劑具有極強的應用前景，該研 究獲得科技部重大國際合作項目資助。 由于本項目的水凝膠可制備短肽抗原的抗體，它在抗體定制中具 有極高的應用前景。目前抗體制備的技術為第一步將短肽連接到載體 蛋白 BSA、KLH 等上，然后打動物 6-10 周。現有技術操作復雜（需 偶聯蛋白）、耗時長（6-10 周），而且很多時候還未能產生有效的抗體。 我們想發展的技術相比于現有技術來說具有明顯的優勢：操作簡單， 僅需物理混合短肽抗原；抗體產生迅速，4-6 周即能生成抗體；抗體 滴度高，由于無需使用載體蛋白，短肽的特異性抗體滴度更高；對于 磷酸化抗體來說，本項目的水凝膠能減少磷酸化短肽被體內磷酸酶去 磷酸化，從而提高磷酸化短肽抗體的比例。
南開大學
2021-04-13
一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法
其他成果/n一種金槍魚骨膠原多肽的制備方法，包括如下步驟：將金槍魚骨蛋白與蒸餾水混勻，并進行加熱加壓處理，得到金槍魚骨蛋白漿液；調節金槍魚骨蛋白漿液pH，并加入木瓜蛋白酶進行酶解，得到酶解液；將酶解液滅酶得到滅酶酶解液；將滅酶酶解液靜置冷卻，離心取上清液后再進行超濾處理，得膠原多肽粗液；將膠原多肽粗液依次加入到陰離子交換樹脂層析柱中洗脫，葡聚糖凝膠柱層析中洗脫，采用高效液相色譜進行純化處理，即得金槍魚骨膠原多肽。該金槍魚骨膠原多肽的制備方法，工藝安全、制備便捷。
武漢輕工大學
2021-01-12