細胞互作的原位捕獲技術
不同細胞之間的相互作用和信息傳遞在包括 免疫 響應 、 器官 發育、神經傳導 在內的眾多生命活動中都扮演 著 關鍵角色 。目前, 研究 細胞互作 的方法 大 都 需要 已知參與 的 細胞類型 ,難以在復雜的活體環境下發現或研究未知的細胞 間 相互作用 。 為了解決這一難題,陳鵬課題組 借助“定向進化”技術和“ 鄰近標記 ”策略,實現了 細胞 之間 動態相互作用的 原位捕獲。這一被命名為 EXCELL ( Enzyme- m ediated proximal cell labeling ) 的技術,通過將 作者 定向進化得到的分選酶( mg SrtA ) 展示在 待研究的 細胞表面, 能夠對與其 相互作用 的 細胞 進行原位捕獲與鑒定 ,為研究細胞 - 細胞相 互作用提供了有力的工具 。 源自 金黃色葡萄球菌 的 分選酶 Sortas e A ( SrtA ) 能夠 催化 分選肽 ( LPETG ) 和寡聚甘氨酸 的 共價連接。近期有文獻報道將 SrtA 用于監測小鼠體內特定受體 - 配體介導的免疫 細胞互作 過程 1 。但是該方法 需要將 SrtA 與 寡聚甘氨酸分別融合在相互作用 的 配體和受體 細胞 上, 因此需要預知 相互作用的 細胞 類型,并對兩類細胞 同時進行 基因 改造 ,因此無法捕捉未知的細胞間相互作用 。本研究突破了這一瓶頸, 建立了 對 SrtA 進行定向進化的高通量 熒光 篩選 平臺,并成功 獲得 了 對單一甘氨酸進行標記的 高活性 SrtA 突變體 - mgSrtA , 能夠 實現對 任意 細胞類型的有效標記。
北京大學
2021-04-11