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細胞互作的原位捕獲技術

2021-04-11 00:00:00
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所屬領域:
生物、醫(yī)藥及醫(yī)療機械
項目成果/簡介:

不同細胞之間的相互作用和信息傳遞在包括 免疫 響應 器官 發(fā)育、神經(jīng)傳導 在內的眾多生命活動中都扮演 關鍵角色 。目前, 研究 細胞互作 的方法 需要 已知參與 細胞類型 ,難以在復雜的活體環(huán)境下發(fā)現(xiàn)或研究未知的細胞 相互作用 。 為了解決這一難題,陳鵬課題組 借助“定向進化”技術和“ 鄰近標記 ”策略,實現(xiàn)了 細胞 之間 動態(tài)相互作用的 原位捕獲。這一被命名為 EXCELL Enzyme- m ediated proximal cell labeling 的技術,通過將 作者 定向進化得到的分選酶( mg SrtA 展示在 待研究的 細胞表面, 能夠對與其 相互作用 細胞 進行原位捕獲與鑒定 ,為研究細胞 - 細胞相 互作用提供了有力的工具 。 源自 金黃色葡萄球菌 分選酶 Sortas e  A   SrtA 能夠 催化 分選肽 LPETG 和寡聚甘氨酸 共價連接。近期有文獻報道將 SrtA 用于監(jiān)測小鼠體內特定受體 - 配體介導的免疫 細胞互作 過程 1 。但是該方法 需要將 SrtA 寡聚甘氨酸分別融合在相互作用 配體和受體 細胞 上, 因此需要預知 相互作用的 細胞 類型,并對兩類細胞 同時進行 基因 改造 ,因此無法捕捉未知的細胞間相互作用 。本研究突破了這一瓶頸, 建立了 SrtA 進行定向進化的高通量 熒光 篩選 平臺,并成功 獲得 對單一甘氨酸進行標記的 高活性 SrtA 突變體 - mgSrtA , 能夠 實現(xiàn)對 任意 細胞類型的有效標記。

項目階段:
未應用
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