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本技術(shù)首先根據(jù)鴨胸軟骨的化學(xué)組成設(shè)計(jì)了一種用于提取鴨硫 酸軟骨素的新型復(fù)合蛋白酶的基礎(chǔ)配方，并利用復(fù)配酶制備鴨硫酸軟骨素，其 工藝包括鴨胸軟骨骨粉的制備、鴨胸軟骨骨粉的酶解提取、蛋白質(zhì)的沉降、硫 酸軟骨素粉末四個(gè)步驟。本發(fā)明采用了復(fù)配酶解法提取鴨胸軟骨的硫酸軟骨素， 采用新型復(fù)合蛋白酶和胰蛋白酶復(fù)配，去掉了堿提這一步，在復(fù)配酶使用上也 進(jìn)行了優(yōu)化，其收率比其它方法提高了 20%左右，產(chǎn)品純度達(dá)到 90%~95%。用復(fù) 合酶代替稀堿或濃堿解離軟骨能夠大大降低對(duì)環(huán)境的污染，并且可以有效縮短 生產(chǎn)周期、降低生產(chǎn)成本、增加了產(chǎn)品收率、提高產(chǎn)品質(zhì)量，填補(bǔ)了該領(lǐng)域的 空白。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn)或者效益預(yù)測(cè):硫酸軟骨素(Chondroitinsulfate，CS)是 D-葡萄糖 醛酸和 N-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷鍵連接而成的重復(fù)二糖單位組成的酸 性黏多糖。硫酸軟骨素具有抗凝血、抗炎癥、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血 脂、防止動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)體內(nèi)水分、清除自由基和延緩衰老等多種生理功 能，可應(yīng)用于食品、藥品、各種保健品及高檔化妝品中。我國(guó)是全球硫酸軟骨 素產(chǎn)量最大的國(guó)家，占全球產(chǎn)量的 80%以上，年平均產(chǎn)量多于 4000 噸；我國(guó)硫 酸軟骨素主要出口到美國(guó)、歐洲、日本等地，其中美國(guó)作為我國(guó)硫酸軟骨素第 一大出口市場(chǎng)，出口份額約占 50%。所以，隨著硫酸軟骨素生物活性功能不斷研 究及其應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)展，硫酸軟骨素用途越來越廣，具有廣闊市場(chǎng)應(yīng)用前 景。

本發(fā)明提供了一種具有ACE抑制功能的魚肉蛋白肽及其制備方法，屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的魚肉蛋白肽制備方法包括：(1)制備去脂的魚肉漿液；(2)調(diào)節(jié)魚肉漿液溫度和pH值1?3，加入胃蛋白酶酶解；(3)調(diào)節(jié)溫度和pH值為6.5?8.0，加復(fù)合蛋白酶酶解；(4)酶解液高溫下保溫后冷至室溫，離心并取上清液通過二步超濾法處理；(5)濾液過柱分離，收集洗脫峰，即得。本發(fā)明方法適于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，不添加任何添加劑，制得的魚肉蛋白肽具有優(yōu)異的ACE抑制功能，IC50小于0.34mg/mL，肽中分子量小于1000D的肽比例為95％以上，易吸收，可廣泛應(yīng)用于特需食品和營(yíng)養(yǎng)食品的制造。

華南理工大學(xué)任嬌艷教授團(tuán)隊(duì)研發(fā)的小分子肽類營(yíng)養(yǎng)支持品，來源于純天然優(yōu)質(zhì)食物蛋白。與注射營(yíng)養(yǎng)制劑不同，該產(chǎn)品可通過口服途徑，安全性高且可長(zhǎng)期使用。本項(xiàng)目旨在：1）用于低蛋白血癥人群（如營(yíng)養(yǎng)不良、慢性感染、晚期惡性腫瘤、肝膽系統(tǒng)疾病等）迅速提升機(jī)體白蛋白含量；2）滿足新冠感染患者對(duì)蛋白營(yíng)養(yǎng)制品的需求；3）為一線醫(yī)護(hù)人員提供中長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)干預(yù)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力；4）緩解臨床對(duì)血液類制品需求供應(yīng)緊張的局面。目前該產(chǎn)品已完成量產(chǎn)下線，且于疫情期間投放多家國(guó)內(nèi)外定點(diǎn)醫(yī)院。

研究人員運(yùn)用生物信息學(xué)分析疊加肝癌隊(duì)列標(biāo)本驗(yàn)證證實(shí)CACYBP在肝癌組織中高表達(dá)，且高表達(dá)CACYBP的肝癌病人總生存時(shí)間及無疾病進(jìn)展時(shí)間更短，預(yù)后更差；而通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及小鼠模型發(fā)現(xiàn)缺失CACYBP的肝癌細(xì)胞株在體內(nèi)和體外的生長(zhǎng)增殖能力顯著減弱。為了研究CACYBP調(diào)控肝癌生長(zhǎng)的分子機(jī)制，研究人員利用串聯(lián)親和純化連用質(zhì)譜技術(shù)，首次鑒定出環(huán)指蛋白41（RNF41）與CACYBP相互作用，并通過泛素化實(shí)驗(yàn)及放線菌酮追蹤檢測(cè)證實(shí)RNF41為CACYBP上游特異的E3泛素連接酶，在肝癌細(xì)胞中促進(jìn)CACYBP的降解，且兩者在肝癌組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CACYBP促進(jìn)Ser10磷酸化使P27Kip1存留在胞漿中，從而加速細(xì)胞周期，促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，而RNF41對(duì)這一過程具有抑制作用。       該研究結(jié)合生物信息學(xué)分析、肝癌隊(duì)列標(biāo)本、細(xì)胞功能及分子機(jī)制驗(yàn)證，一方面揭示了CACYBP促進(jìn)肝癌生長(zhǎng)增殖的上下游分子機(jī)制，另一方面為開發(fā)新型肝癌診療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。

提出并發(fā)展了一種蛋白質(zhì)“鄰近脫籠”策略，將可遺傳編碼的非天然氨基酸脫籠技術(shù)與計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)篩選技術(shù)相結(jié)合，在一系列不同種類的蛋白質(zhì)上實(shí)現(xiàn)了高時(shí)間分辨的原位激活，為在活細(xì)胞及活體動(dòng)物內(nèi)研究蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)調(diào)控機(jī)制提供了一種普適性技術(shù)。利用這一被命名為 CAGE-prox 的新方法，他們建立并驗(yàn)證了“激酶正交激活和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控”、   “時(shí)間分辨的蛋白質(zhì)組學(xué)分析”，“基于毒素蛋白的抗腫瘤蛋白前藥”等一系列原創(chuàng)應(yīng)用，展示了這一化學(xué)生物學(xué)新技術(shù)在開展蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)功能研究與調(diào)控中的優(yōu)勢(shì)和特色?！盎瘜W(xué)脫籠”策略，可通過對(duì)蛋白質(zhì)關(guān)鍵殘基的化學(xué)保護(hù)和脫保護(hù)反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)其活性的“關(guān)－開”調(diào)控（Nat. Chem. Biol. 2016, 12, 129）。利用這一技術(shù)，他們先后在賴氨酸（Nat. Chem., 2014, 6, 352; Nat. Chem. Biol., 2014, 10, 1003）、酪氨酸（J. Am. Chem. Soc., 2016, 138, 15118）等天然氨基酸側(cè)鏈上實(shí)現(xiàn)了生物正交斷鍵反應(yīng)和化學(xué)脫籠，開展了激酶等蛋白質(zhì)家族的特異激活和機(jī)制研究（ACS Cent. Sci, 2016, 2, 325，ACS Cent. Sci. 2019, 5, 145）。由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的種類繁多、活性調(diào)控機(jī)制各異，目前該方法仍受可供脫籠的氨基酸種類限制，無法適用于所有蛋白質(zhì)。

真菌疏水蛋白具有自我裝配成膜的性質(zhì)，因此 （1）疏水蛋白可作為蛋白和細(xì)胞固定化的媒介，可用于生物傳 感器和生物芯片，作為引發(fā)層，交聯(lián)上配體或形成融合蛋白，能使特 定分子固定化到特定表面。 （2）它能改變表面的屬性，保護(hù)表面?？捎糜谔岣哚t(yī)學(xué)器官移 植物生物相容性和防止微生物細(xì)胞粘附；可應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)中燒傷、 創(chuàng)傷的創(chuàng)面保護(hù)，為臨床病人創(chuàng)面保護(hù)和恢復(fù)提供一種安全無毒、操 作簡(jiǎn)便、高效低耗的新手段。 （3）作為一種生物表面活性劑，疏水蛋白還可以用于促進(jìn)土壤 中的污染物的降解和應(yīng)用在石油泄漏后回收石油的過程中。 （4）疏水蛋白具有表面活性，可用于食品對(duì)抗相變能力并形成 穩(wěn)定泡沫，使其在密封食品生產(chǎn)上發(fā)揮重要作用； （5）也可用于日用化妝品生產(chǎn)中，因疏水蛋白可以作為洗潔產(chǎn) 品的成分，根據(jù)其疏水、親水兩相間的轉(zhuǎn)變，可通過自我裝配而將面 部的油脂等疏水的成分包裹起來，再用水清洗將其除去，也可以作為 保護(hù)秀發(fā)的天然膜，使發(fā)部維持清潔并保持一定水分；將它運(yùn)用到面 部的美容護(hù)理，由于它的特性，能使皮膚表面形成一層天然生物活性 保護(hù)膜，起到皮膚保濕、免受外界空氣中污濁物的侵害，從而達(dá)到護(hù)膚美容之功效。 （6）疏水蛋白直接包裹藥物以改變藥物溶解性并實(shí)現(xiàn)控、緩釋。 通過真菌疏水蛋白與難溶于水的藥物混合，可以達(dá)到良好的分散效果， 并延長(zhǎng)了兩種藥物的藥效持續(xù)時(shí)間。 （7）真菌疏水蛋白與其他的功能性蛋白或小肽組成融合蛋白， 同時(shí)發(fā)揮疏水蛋白的穩(wěn)定吸附材料表面的特性和功能性蛋白或小肽 的特異性功能，如在組織工程、抗炎抗菌材料等。 項(xiàng)目特色： 純天然生物制品，無毒害，無污染。耐酸堿，抗相變能力強(qiáng)。自 我裝配形成有活性的蛋白膜。具有良好的熱穩(wěn)定性和透氣不透水性。 由于它的特性，使得它具有：（1）自動(dòng)成膜，無需貼敷，使用便利； （2）透氣性優(yōu)良；(3)純天然無化學(xué)添加成分，瑞氏木霉已被證明是 安全的菌種；（4）組織相容性好，避免了嚴(yán)重的排異反應(yīng)；（5）耐高 溫（100 攝氏度仍保持活性），易于消毒；（6）穩(wěn)定不降解，便于產(chǎn)品 的長(zhǎng)期保存；（7）用表面活性劑就可以很容易地清洗（8）延展性好， 1 毫克的疏水蛋白在液面就可以展開 1 平方米的薄膜（9）透明，可直 接透過成膜觀察（10）性價(jià)比高。 市場(chǎng)應(yīng)用前景： 目前國(guó)際上尚未實(shí)現(xiàn)疏水蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)，其相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)品的 開發(fā)更為滯后。我們?cè)谝褜?shí)現(xiàn)疏水蛋白中試研發(fā)的基礎(chǔ)上，擴(kuò)大發(fā)酵 規(guī)模，進(jìn)行后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)，我們的技術(shù)和工藝現(xiàn)居國(guó)際領(lǐng)先地位， 無疑會(huì)占有寶貴的先機(jī)。 疏水蛋白產(chǎn)品將作為新一代膜生物活性材料進(jìn)入市場(chǎng)，它的出現(xiàn) 將會(huì)革命性地取代現(xiàn)有化學(xué)產(chǎn)品，這無疑給人類的健康帶來了很大的 益處，消除人類在預(yù)防和治療疾病、食品加工、以及醫(yī)學(xué)檢測(cè)、食物保鮮方面為健康做出努力的同時(shí)給自身帶來的潛在危害，而且價(jià)格更 為低廉。因此，本項(xiàng)目大規(guī)模生產(chǎn)疏水蛋白及其應(yīng)用開發(fā)是有非常廣 闊的市場(chǎng)前景的，并且我們的技術(shù)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)處于領(lǐng)先地位。 這些產(chǎn)品都將在國(guó)際市場(chǎng)上處于最優(yōu)競(jìng)爭(zhēng)狀態(tài)。

通過計(jì)算機(jī)虛擬篩選和建立熒光共振能量轉(zhuǎn)移的體外高通量篩選體系，篩選得到新型的ATG4B小分子抑制劑S130。通過對(duì)自噬信號(hào)通路的研究，發(fā)現(xiàn)S130不影響自噬體功能及其與溶酶體的融合，而是抑制了LC3-PE的去脂化過程，最終阻斷細(xì)胞自噬。這為進(jìn)一步明確ATG4B在自噬信號(hào)通路中的調(diào)控作用提供了新的理論基礎(chǔ)。通過抗腫瘤作用的研究，發(fā)現(xiàn)S130可有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，且營(yíng)養(yǎng)缺乏能進(jìn)一步增強(qiáng)S130的抗腫瘤效果，而過表達(dá)ATG4B可部分對(duì)抗S130引起的腫瘤細(xì)胞死亡，提示ATG4B可能是腫瘤治療中的潛在靶點(diǎn)。同時(shí)，藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該抑制劑在體內(nèi)主要分布于腫瘤組織，從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。綜上，該研究表明ATG4B可能是腫瘤治療的潛在藥物靶標(biāo)，而S130作為高效的ATG4B小分子抑制劑具有開發(fā)成為腫瘤治療藥物的潛能。

本發(fā)明涉及分子微生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種C型凝集素(C-type?lectin)及其制備和應(yīng)用。C型凝集素為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。制備方法：以許氏平鮋cDNA為模板PCR擴(kuò)增C型凝集素基因，構(gòu)建質(zhì)粒pLecC；將pLecC轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21Transetta(DE3)，對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后，收集上清，濃縮后即得重組C型凝集素。所述C型凝集素對(duì)多種弧菌具高效凝集作用，經(jīng)C型凝集素處理后的細(xì)菌對(duì)許氏平鮋的侵染能力顯著降低。因此，該C型凝集素有望應(yīng)用于魚類細(xì)菌性病害的防治。

本項(xiàng)目是采用種子蛋白質(zhì)基因工程手段，將富含賴氨酸的豌豆球蛋白基因（Vicilingene）轉(zhuǎn)入超大穗小麥體內(nèi)并令其表達(dá)，以期大幅度提高超大穗小麥的種子蛋白質(zhì)含量和賴氨酸含量，改良超大穗小麥的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)，使超大穗小麥盡快成為大面積推廣種植的超高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)小麥良種。其次，本項(xiàng)研究將豐富分子遺傳學(xué)理論并開辟一條高蛋白品質(zhì)育種的新途徑，所

Mpa六聚體除了與真核生物蛋白酶體調(diào)節(jié)顆粒Rpt1-Rpt6蛋白六聚體以及古細(xì)菌PAN蛋白六聚體具有一定的結(jié)構(gòu)同源性之外，還具有一些明顯不同的結(jié)構(gòu)特征：（1）結(jié)核桿菌Mpa具有形成雙環(huán)的兩個(gè)串聯(lián)寡核苷酸/寡糖結(jié)合（OB）結(jié)構(gòu)域，而古細(xì)菌蛋白酶體相關(guān)ATPase調(diào)控顆粒（PAN）和真核生物蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒復(fù)合體（Rpt1-6）每個(gè)蛋白亞基都只具有單個(gè)OB結(jié)構(gòu)域；（2）Mpa在具有蛋白酶體活化功能的C末端之前具有一個(gè)泛素樣的β-grasp結(jié)構(gòu)域，而古細(xì)菌PAN和真核生物Rpt1-6蛋白復(fù)合體并不具有這樣的一個(gè)β-grasp結(jié)構(gòu)域? 由于β-grasp結(jié)構(gòu)域的存在，Mpa六聚體中各個(gè)蛋白亞基C末端被埋在結(jié)構(gòu)核心中而沒有暴露在蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)的表面，這就影響了C末端的GQYL基序與20S 蛋白酶體復(fù)合體的對(duì)接，從而阻礙了六聚化的Mpa與七次對(duì)稱的28聚體的蛋白酶體相互作用。我們通過功能研究進(jìn)一步解釋了為什么單獨(dú)的Mpa六聚體在體外情況下不能有效結(jié)合蛋白酶體核心顆粒并啟動(dòng)蛋白質(zhì)特異性降解，結(jié)合晶體結(jié)構(gòu)域功能研究，我們提出了結(jié)核桿菌蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒Mpa與20S蛋白酶體復(fù)合體這一分子量超過1100KDa蛋白質(zhì)機(jī)器的作用模型