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本發(fā)明公開(kāi)了一種水包油型疫苗佐劑、其制備及應(yīng)用。所述的水包油型納米乳疫苗佐劑，按照質(zhì)量百分比包括 0.1％～10％的油相、0.1％～10％的乳化劑、0.1％～3％的穩(wěn)定劑、0.1％～3％的絡(luò)合劑以及 0.01％～10％的免疫增強(qiáng)劑。其制備方法包括以下步驟：(1)將免疫增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑和絡(luò)合劑均勻分散于水中，獲得水相；(2)將油相和乳化劑混合，獲得油相；(3)將油相緩慢加入到水相中并持續(xù)攪拌，形成穩(wěn)定的乳液；(4)調(diào)節(jié)乳液的 pH 值并定容得到初乳；(5)將初乳進(jìn)行高速剪切和高壓均質(zhì)。本發(fā)明提供的疫苗佐

本發(fā)明涉及生物免疫領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種雞球蟲(chóng)病疫苗的免疫方法，具體為對(duì)1日齡雛雞經(jīng)口免疫球蟲(chóng)病疫苗，1～3天后，再次經(jīng)口免疫相同的球蟲(chóng)病疫苗。按照本發(fā)明所述方法進(jìn)行雞球蟲(chóng)病疫苗免疫，既可有效避免初次免疫后大量排出卵囊被雞群食入爆發(fā)球蟲(chóng)病的風(fēng)險(xiǎn)，又可提高球蟲(chóng)病疫苗免疫的整齊度至90％以上，還可迅速建立免疫保護(hù)力，對(duì)球蟲(chóng)再次感染實(shí)現(xiàn)更好的保護(hù)，減緩因疫苗免疫引起的生產(chǎn)性能下降，增加養(yǎng)殖效益。同時(shí)，可降低或杜絕抗球蟲(chóng)藥物的使用量，提供更加安全、綠色的禽肉和蛋產(chǎn)品。不僅如此，還節(jié)約了現(xiàn)有免疫方法的成本，經(jīng)濟(jì)效益巨大。

MPL?是 Corixa 公司商業(yè)化生產(chǎn)的的疫苗佐劑，在歐洲和澳大利亞應(yīng)用于臨 床實(shí)驗(yàn)。研究表明，MPL?只能激活 TLR4-TRAM-TRIF 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，而不能激活 TLR4-Mal-MyD88 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[34]，因此只會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生適量的細(xì)胞因子，而不引發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。除 MPL?外，其它結(jié)構(gòu)類脂 A 分子，如單磷酸類脂 A（MPLA），也能在降低自身毒性的同時(shí)保留免疫刺激能力，因此開(kāi)發(fā)類脂 A 疫苗佐劑成為近 幾年研究的熱點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)室利用染色體基因敲除和整合技術(shù)，構(gòu)建一系列能合成不同結(jié)構(gòu)類脂 A分子的大腸桿菌基因工程菌。其中HW001菌株能產(chǎn)生可用于疫苗佐劑的M-MPLA， 通過(guò) TLC 及 ESI/MS 鑒定，該菌株可合成單一的 MPLA 結(jié)構(gòu)，在 LPS 免疫功能中起著重要作用。具有重要的應(yīng)用前景，生產(chǎn)方法簡(jiǎn)單，利用簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基即可實(shí)現(xiàn)M-MPLA 的大量生產(chǎn)。此外，本實(shí)驗(yàn)室具有成熟的 M-MPLA 提純工藝，可實(shí)現(xiàn)從菌株、發(fā)酵到純化整個(gè)工藝的轉(zhuǎn)讓。

遲鈍愛(ài)德華氏菌 ( Edwardsiella tarda) 是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中具有極大危害的革蘭氏陰性病原 菌，是近年來(lái)經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)種鲆鰈類腹水病的首要病原之一。由于該菌為兼性胞內(nèi)寄生菌，傳統(tǒng) 的防治手段對(duì)其效果不佳，針對(duì)其致病機(jī)制研究，開(kāi)發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的候選疫苗，將為我 國(guó)海水養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展做出貢獻(xiàn)。 本項(xiàng)目從山東患病大菱鲆體內(nèi)分離獲得一系列遲鈍愛(ài)德華氏菌株，通過(guò)在模式動(dòng)物上進(jìn)行 半致死劑量實(shí)驗(yàn)，成功篩選出遲鈍愛(ài)德華氏菌強(qiáng)毒株EIB202和弱毒株EIBAV1。弱毒株EIBAV1 對(duì)大菱鲆進(jìn)行免疫，其免疫保護(hù)力可達(dá)70%以上，通過(guò)臨床前效力及安全試驗(yàn)證明EIBAV1是 一株良好的疫苗候選株。 遲鈍愛(ài)德華氏菌弱毒疫苗可用于腹水病害的防治，接種該疫苗的鲆鰈類經(jīng)濟(jì)魚(yú)種可有效 抵御由遲鈍愛(ài)德華氏菌引起腹水病，其免疫保護(hù)力可達(dá)70%以上，減少由腹水病引起的經(jīng)濟(jì)損 失

成果描述：通過(guò)對(duì)豬場(chǎng)PEDV分子流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前PEDV流行毒株與目前使用的PEDV疫苗基因型差別較大，使用現(xiàn)有疫苗對(duì)豬群免疫后豬群不能抵抗流行毒株攻擊。本創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)分離并純化獲得了一株屬于目前流行基因型毒株的PEDV，通過(guò)在VERO細(xì)胞中連續(xù)傳代及培養(yǎng)條件優(yōu)化，分離株適應(yīng)在VERO傳代細(xì)胞中穩(wěn)定生長(zhǎng)。擬與動(dòng)物疫苗制品公司合作，研究開(kāi)發(fā)預(yù)防目前PEDV流行毒株的PEDV滅活疫苗。市場(chǎng)前景分析：疫苗投入生產(chǎn)和使用后，預(yù)計(jì)在全國(guó)市場(chǎng)占有率達(dá)到20%以上與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：已進(jìn)行申報(bào)臨床試驗(yàn)，效果好

四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的重組蛋白新冠疫苗于2020年8月21日獲得國(guó)家藥監(jiān)局臨床試驗(yàn)批文。8月28日，Ⅰ期臨床研究在中國(guó)醫(yī)藥城啟動(dòng)培訓(xùn)工作。目前，所有受試者感覺(jué)良好，沒(méi)有出現(xiàn)不良反應(yīng)。該疫苗靶向SARS-CoV-2使用其刺突蛋白受體結(jié)合域（S-RBD），產(chǎn)生中和抗體阻斷病毒感染人體細(xì)胞。7月29日，四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室作為第一作者單位和通訊作者單位，在Nature 在線發(fā)表題為“A vaccine targeting the RBD of the S protein of SARS-CoV-2 induces protective immunity”的研究論文，該論文的通訊作者是魏霞蔚研究員、逯光文教授與張康教授，第一作者是楊靜云博士、王瑋教授以及楊自敏博士等，這也是Nature雜志發(fā)表的第一篇新冠疫苗研究論文。該疫苗在猴子等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有很好的預(yù)防SARS-CoV-2感染的保護(hù)作用，未見(jiàn)明顯的副作用。 該疫苗利用昆蟲(chóng)細(xì)胞在培養(yǎng)液中大量繁殖，將新冠病毒的基因引入昆蟲(chóng)細(xì)胞，該細(xì)胞作為工廠生產(chǎn)出高質(zhì)量的重組疫苗蛋白，并進(jìn)行精致純化，該技術(shù)易于大規(guī)模生產(chǎn)投入市場(chǎng)。利用昆蟲(chóng)生產(chǎn)重組蛋白疫苗，在歐美等國(guó)家已有宮頸癌疫苗與流感疫苗上市，其在人體的安全性得到了驗(yàn)證。團(tuán)隊(duì)正在積極推進(jìn)該疫苗的臨床試驗(yàn)與落戶成都高新區(qū)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，正在規(guī)劃與設(shè)計(jì)年產(chǎn)上億針的生產(chǎn)線。該疫苗的研發(fā)過(guò)程中也得到了國(guó)家科技部、國(guó)家衛(wèi)健委與教育部，與省市等部門的大力支持，也得到了國(guó)內(nèi)多家科研單位參與合作。四川大學(xué)華西醫(yī)院、疫苗研究團(tuán)隊(duì)與生物城成立了成都威斯克生物醫(yī)藥有限公司，正在規(guī)劃與設(shè)計(jì)年產(chǎn)上億針的生產(chǎn)線，將實(shí)現(xiàn)全套設(shè)備國(guó)產(chǎn)自主研發(fā)。

小試階段/n該項(xiàng)目開(kāi)發(fā)了能特異性結(jié)合BCG糖脂抗原的DNA適配子及其應(yīng)用，屬于分子微生物學(xué)和感染免疫學(xué)領(lǐng)域。發(fā)明的DNA適配子可特異性與BCG表面ManLAM結(jié)合，募集并活化更多樹(shù)突狀細(xì)胞到外周淋巴結(jié)、抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性B細(xì)胞增殖、增強(qiáng)Th1型細(xì)胞反應(yīng)等，提高BCG的免疫原性；小鼠結(jié)核攻毒動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明BCG與本發(fā)明DNA適配子聯(lián)合免疫小鼠后，獲得比單獨(dú)BCG免疫更強(qiáng)的免疫保護(hù)作用。該發(fā)明公開(kāi)的DNA適配子可以用于制備新型免疫佐劑以增強(qiáng)BCG抗結(jié)核感染的免疫原性，為結(jié)核病防治提供了新的策略和新的

本實(shí)用新型公開(kāi)了一種魚(yú)苗注射疫苗用的自動(dòng)夾持裝置，主要包括外殼，光電傳感器，安裝在外殼上的上夾板部分和下夾板部分，及控制模塊。外殼上開(kāi)有供注射用的狹縫、供魚(yú)苗進(jìn)入的小口和放行魚(yú)苗的槽。本實(shí)用新型可以實(shí)現(xiàn)在魚(yú)類疫苗注射系統(tǒng)中對(duì)魚(yú)苗進(jìn)行自動(dòng)夾持。本實(shí)用新型尤其可利用旋轉(zhuǎn)氣缸和扭轉(zhuǎn)彈簧實(shí)現(xiàn)魚(yú)苗自動(dòng)夾持，自動(dòng)化程度高、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、可靠性強(qiáng)，可以有效提高魚(yú)苗自動(dòng)化接種效率。