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研發(fā)階段/n該發(fā)明屬于動(dòng)物病毒學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。利用基因工程方法和DNA重組方法將PrV的主要毒力基因TK和糖蛋白基因gI、gE編碼區(qū)刪除，導(dǎo)致PrV毒力下降，公開(kāi)了一種三基因缺失的重組偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PrV)毒株的構(gòu)建、用該毒株制備的疫苗、構(gòu)建該毒株的方法以及制備該疫苗方法說(shuō)的重組偽狂犬病毒株缺失了TK、gE、gI基因，且不含外源基因。所說(shuō)的疫苗屬于含有該發(fā)明的病毒液和明膠制成的凍干活疫苗。發(fā)明的重組-突變株遺傳穩(wěn)定，不會(huì)返強(qiáng)。該發(fā)明還包括將所說(shuō)的活疫苗接種于仔豬、育肥豬

本工作成果構(gòu)建了新型可離子化脂質(zhì)分子庫(kù)，可通過(guò)排列組合形成數(shù)十個(gè)新型可離子化脂質(zhì)，已掌握脂質(zhì)納米顆粒構(gòu)建的核心技術(shù)。 一、項(xiàng)目分類 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、技術(shù)分析 相對(duì)傳統(tǒng)疫苗（如滅活疫苗、重組蛋白疫苗等），mRNA 疫苗具有應(yīng)變能力快、制備簡(jiǎn)單、免疫效力強(qiáng)等特點(diǎn)，在控制病毒傳染性疾病中具有至關(guān)重要的作用。脂質(zhì)納米顆粒（LNP）是介導(dǎo)mRNA在人體內(nèi)發(fā)揮功能的最優(yōu)解。Pfizer和Moderna公司構(gòu)建的LNP依然被認(rèn)為是“best-in-class”的mRNA疫苗遞送技術(shù)。其中關(guān)鍵組分雙親性可離子化脂質(zhì)的合理設(shè)計(jì)可達(dá)到mRNA有效遞送和釋放。但脂質(zhì)納米顆粒核心技術(shù)專利集中于少數(shù)國(guó)外公司如Arbutus、Moderna、CureVac和BioNtech，專利壁壘高。目前，我國(guó)沒(méi)有自主研發(fā)的高效并安全的用于人體的mRNA遞送系統(tǒng)，致使歐美可隨時(shí)限制我國(guó)的mRNA疫苗生產(chǎn)。 本工作成果構(gòu)建了新型可離子化脂質(zhì)分子庫(kù)，可通過(guò)排列組合形成數(shù)十個(gè)新型可離子化脂質(zhì)，已掌握脂質(zhì)納米顆粒構(gòu)建的核心技術(shù)。目前已成功合成并進(jìn)行活性驗(yàn)證的新型可離子化脂質(zhì)4個(gè)。其中，脂質(zhì)A1-D1-5的活性最佳，基于其制備的LNP不但成功地載荷小干擾RNA在小鼠體內(nèi)有效地治療了代謝疾病，還實(shí)現(xiàn)了高效的mRNA負(fù)載和體內(nèi)遞送。代謝疾病的治療成果發(fā)表在國(guó)際學(xué)術(shù)期刊Science Advances上，mRNA負(fù)載系統(tǒng)已經(jīng)與多家公司開(kāi)展合作進(jìn)行臨床前開(kāi)發(fā)工作。

本發(fā)明的目的是提供一種鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗，即采用生物技術(shù)對(duì)鴨坦布蘇病毒E蛋白進(jìn)行抗原表位分析、拼接，獲得一種鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，并以該融合蛋白作為抗原來(lái)制備鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗。本發(fā)明中鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，其編碼蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO:1；其中一種核苷酸序列為SEQ ID NO:2。本發(fā)明利用pET28a（+）表達(dá)性載體構(gòu)建了能表達(dá)鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE的大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌。將重組表達(dá)的蛋白純化后制備成基因工程亞單位疫苗，可使免疫后鴨群獲得免疫保護(hù)。

本發(fā)明涉及一種利用噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因轉(zhuǎn)化制備鴨疫里默氏菌前菌影疫苗的方法與應(yīng)用方法。該方案首先將噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因通過(guò)柔性連接臂(Gly4Ser)3連接成串聯(lián)基因，并進(jìn)一步構(gòu)建溫控表達(dá)載體pBV-E-SN。將pBV-E-SN電擊轉(zhuǎn)化進(jìn)入鴨疫里默氏菌原生質(zhì)體，篩選陽(yáng)性克隆28℃增菌培養(yǎng)。分離菌體加保護(hù)劑后分裝、冷凍干燥。本發(fā)明所制備的活菌疫苗經(jīng)飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發(fā)體液免疫。

本產(chǎn)品為增強(qiáng)黏膜免疫的口服活載體疫苗，是新一代預(yù)防和治療乳仔豬腹瀉的特異 性免疫微生態(tài)制劑。主要成分為活菌乳酸重組菌，活菌總數(shù)≥3.5×109cfu/g，同時(shí)也 含有死菌以及代謝產(chǎn)物。活菌進(jìn)入機(jī)體后可定植在腸壁，通過(guò)生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生的乳酸和 乙酸，降低了腸道的PH及Eh值，改善內(nèi)部微環(huán)境，能抑制有害菌的生長(zhǎng)，其代謝產(chǎn)物對(duì) 機(jī)體有營(yíng)養(yǎng)作用，促進(jìn)免疫功能的作用。 該乳酸重組菌可促進(jìn)腸道有益菌落生長(zhǎng)繁殖，拮抗和抑制腸道內(nèi)有害菌增殖，糾正 腸道菌群紊亂，產(chǎn)生特異性抗體，預(yù)防和治療豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉等病毒引起 的腹瀉、下痢、細(xì)菌性腸炎等疾病，增強(qiáng)免疫力和抗病力。

本產(chǎn)品為增強(qiáng)黏膜免疫的口服活載體疫苗，是新一代預(yù)防和治療乳仔豬腹瀉的特異性免疫微生態(tài)制劑。主要成分為活菌乳酸重組菌，活菌總數(shù)≥3.5×109cfu/g，同時(shí)也含有死菌以及代謝產(chǎn)物。活菌進(jìn)入機(jī)體后可定植在腸壁，通過(guò)生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生的乳酸和乙酸，降低了腸道的PH及Eh值，改善內(nèi)部微環(huán)境，能抑制有害菌的生長(zhǎng)，其代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體有營(yíng)養(yǎng)作用，促進(jìn)免疫功能的作用。 該乳酸重組菌可促進(jìn)腸道有益菌落生長(zhǎng)繁殖，拮抗和抑制腸道內(nèi)有害菌增殖，糾正腸道菌群紊亂，產(chǎn)生特異性抗體，預(yù)防和治療豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉等病毒引起的腹瀉、下痢、細(xì)菌性腸炎等疾病，增強(qiáng)免疫力和抗病力。

已有樣品/n表達(dá)副豬嗜血桿菌表面抗原的豬霍亂沙門氏菌減毒疫苗。　　成果簡(jiǎn)介：利用仔豬副傷寒商品疫苗菌株豬霍亂沙門氏菌C500作為宿主菌株，插入已經(jīng)蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選鑒定的副豬嗜血桿菌重要免疫原性基因，從而獲得副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程疫苗菌株，重組疫苗菌株能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生良好的體液免疫、細(xì)胞免疫以及粘膜免疫，對(duì)小鼠的免疫與攻毒試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)二聯(lián)重組疫苗具有同時(shí)抵抗副豬嗜血桿菌病和沙門氏菌病的能力，具有良好的應(yīng)用前景。　　應(yīng)用前景：副豬嗜血桿菌-豬霍亂沙門氏菌二聯(lián)基因工程口服疫苗菌株對(duì)小鼠

已有樣品/n呼吸道合胞病毒（RSV）是引起嬰幼兒肺炎的首要病因，福爾馬林滅活疫苗產(chǎn)生低中和活性抗體以及偏向Th2型免疫應(yīng)答，反而引起“疫苗依賴的感染增強(qiáng)”，因此，國(guó)內(nèi)外均無(wú)疫苗上市。本發(fā)明采用抗原抗體免疫復(fù)合物的新思路，提供了一種RSV抗原蛋白F與抗體恒定區(qū)Fc的融合蛋白(F-Fc)的制備方法，及其作為RSV亞單位疫苗的應(yīng)用。融合蛋白經(jīng)粘膜途徑（滴鼻）免疫，使用安全方便，并可在呼吸道誘導(dǎo)強(qiáng)的體液免疫和偏向Th1型細(xì)胞免疫。

7月4日，著名期刊《SignalTransductionandTargetedTherapy》（IF:38.104）在線發(fā)表我校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床藥學(xué)學(xué)院疫苗中心林昂、唐昕瑩團(tuán)隊(duì)在新冠疫苗領(lǐng)域的最新研究成果“UnravellingtheenhancedvaccineimmunitybyheterologousKCONVAC/Ad5-nCoVCOVID-19vaccination”。

研發(fā)階段/n該項(xiàng)目屬于動(dòng)物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒活載體疫苗。該疫苗株rDEV-HA5保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC?NO：V201404。本發(fā)明的構(gòu)建方法是：在鴨腸炎病毒人工染色體質(zhì)粒pBAC-C-KCE中插入了H5N1亞型禽流感病毒ha基因的片段得到重組質(zhì)粒pBAC-C-KCE-HA5。所述的質(zhì)粒pBAC-C-KCE的基因結(jié)構(gòu)組成如圖7所示；所述質(zhì)粒pBAC-C-KCE-HA5的基因結(jié)構(gòu)組成如圖14所示。生物學(xué)功能驗(yàn)證表明，本發(fā)明的疫苗有