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氟嘧菌酯是農(nóng)藥殺菌劑，廣泛用于治療水稻，小麥，馬鈴薯，蔬菜，咖啡等作物的枯葉 病。氟嘧菌酯的商標(biāo)名為，中文商品名，國外專利即將到期。 本課題組已完成氟嘧菌酯原料藥合成，工藝路線先進(jìn)，有成本和環(huán)保優(yōu)勢，利潤空間大。 目前在進(jìn)行制劑研究，計(jì)劃進(jìn)行國家批文申請。

從多種環(huán)境中篩選出具有高效增殖和益生能力的枯草芽孢桿菌、臘樣芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌、反硝化菌等微生物菌株，分別建立了高密度發(fā)酵工藝和菌體回收、節(jié)能干燥、高活力保藏以及制劑復(fù)配技術(shù)。 

（一）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌NJYH63305是團(tuán)隊(duì)自行篩選的有益芽孢桿菌，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品保健、飼料等領(lǐng)域。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，是一種集抑菌、殺蟲、促生于一體的環(huán)境友好型高效生防制劑，對茶輪斑病菌、黃瓜枯萎病菌、立枯絲核菌、煙草赤星病菌、茶云紋葉枯病菌、小麥全蝕病菌、小麥紋枯病、尖鐮孢菌、鐮刀菌、終極腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有較強(qiáng)抑制作用。在醫(yī)藥領(lǐng)域，可調(diào)節(jié)人體腸道微生態(tài)平衡，適于治療急慢性痢疾、腸炎、腹瀉、嬰幼兒腹瀉引起的腸功能紊亂等；在食品保健領(lǐng)域，可作為食品添加劑，長期服用能促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，減少腸道疾病的發(fā)生，提高免疫能力、增強(qiáng)抗病能力。 1、蠟樣芽孢桿菌國內(nèi)外研究進(jìn)展目前，國內(nèi)外蠟狀芽孢桿菌研究大多處于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)研究階段，其商品化并應(yīng)用于農(nóng)業(yè)防治的實(shí)例較少。國內(nèi)市場上蠟樣芽孢桿菌農(nóng)用制劑大部分為復(fù)配試劑，同時(shí)其大規(guī)模培養(yǎng)過程中也存在不少問題，如發(fā)酵放大過程信息采集困難、制劑有效期不長、產(chǎn)品貨架期短等，這些問題的深入研究對解決蠟樣芽孢桿菌高密度培養(yǎng)瓶頸、降低蠟樣芽孢桿菌生產(chǎn)成本、促進(jìn)細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)領(lǐng)域重大突破具有重要意義。2、本課題組技術(shù)優(yōu)勢（1）團(tuán)隊(duì)以項(xiàng)目為紐帶，建立了蠟樣芽孢桿菌在線監(jiān)控的高密度培養(yǎng)與多階段發(fā)酵集成技術(shù)，在1000L發(fā)酵罐上蠟樣芽孢桿菌活菌數(shù)高達(dá)800億個(gè)/g, 比初始培養(yǎng)提高了230%，達(dá)國際領(lǐng)先水平；（2）篩選的芽孢保護(hù)劑，可提高蠟樣芽孢桿菌活性，延長半衰期40％以上；（3）協(xié)同江蘇省農(nóng)科院及南京農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站進(jìn)行綠色防控技術(shù)推廣，于江蘇浦口林大蔬菜基地、江寧區(qū)湖熟街道設(shè)施蔬菜基地、溧水傅家邊茶廠等地建立2800畝示范區(qū)，重點(diǎn)試驗(yàn)核心區(qū)460畝。推廣示范區(qū)內(nèi)，蠟樣芽孢桿菌對水稻紋枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率達(dá)51.8％～85.9％，與蘇云金芽孢桿菌（Bt）進(jìn)行增效試驗(yàn)，小菜蛾殺滅率提高29%，降低化學(xué)農(nóng)藥使用量50％以上，農(nóng)藥殘留量低于國家無公害農(nóng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)；（4）目前已在國內(nèi)外重要期刊發(fā)表學(xué)術(shù)論文10余篇，出版專著《高效有益微生態(tài)制劑開發(fā)與利用——蠟樣芽孢桿菌》，申請國家發(fā)明專利4項(xiàng)，授權(quán)3項(xiàng)，其中3項(xiàng)（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百藥業(yè)有限公司成功實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。（二）凝結(jié)芽孢桿菌團(tuán)隊(duì)自行篩選獲得一株益生凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點(diǎn)。凝結(jié)芽孢桿菌為兼性厭氧菌，進(jìn)入腸道后會(huì)消耗游離氧，有利于厭氧微生物乳酸菌和雙歧桿菌的生長，多用于調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)菌群平衡，團(tuán)隊(duì)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的凝結(jié)芽胞桿菌NJYHHWG 877005對甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很強(qiáng)的防治效果，可進(jìn)行新型高效生物農(nóng)藥的開發(fā)。

本實(shí)用新型涉及一種乳酸菌計(jì)數(shù)裝置，包括透明計(jì)數(shù)盒，計(jì)數(shù)盒內(nèi)底部設(shè)置有計(jì)數(shù)線，計(jì)數(shù)盒一端設(shè)置為開口，開口上設(shè)置有密封蓋，計(jì)數(shù)盒側(cè)壁內(nèi)設(shè)置有電熱絲，計(jì)數(shù)盒兩側(cè)設(shè)置有滑軌，滑軌內(nèi)滑動(dòng)設(shè)置有位于計(jì)數(shù)盒上方的放大鏡，計(jì)數(shù)盒底部設(shè)置有底座，底座內(nèi)設(shè)置有平板燈，平板燈和電熱絲均與控制器相連，控制器設(shè)置于底座內(nèi)；本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，計(jì)數(shù)過程中保證乳酸菌的活性，具有計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，效率高的特點(diǎn)。

可以量產(chǎn)/n該品種子實(shí)體叢生、或單生；片狀，有時(shí)疊生或叢生菊花狀，腹面光滑，黃褐色，極少絨毛，中凹，邊緣波狀或平滑，內(nèi)卷；耳片薄，半透明；背面淡黃褐色，有明顯脈紋，極少無脈紋。耳片直徑6～12cm，厚0.8－1.0mm，干后皺縮成耳廓狀。栽培方式為段木栽培，樹種以麻櫟、栓皮櫟、油桐、烏桕、楓香等樹種均可。在適宜栽培條件下（配方、地區(qū)和季節(jié)）每根段木產(chǎn)干耳120g以上。技術(shù)水平：國家認(rèn)定食用菌新品種（編號：2008014）應(yīng)用前景：該品種來源于野生菌株馴化，經(jīng)多年系統(tǒng)選育和選優(yōu)復(fù)壯獲得。定植快，接種穴

 膽固醇又稱膽笛醇， 是動(dòng)物組織細(xì)胞不可或缺的重要物質(zhì)， 它不但可以參加形成細(xì)胞膜， 而且

可以量產(chǎn)/n戊二醛是一種五碳雙縮醛化合物, 廣泛應(yīng)用于手術(shù)器械的滅菌和環(huán)境物品的消毒及食品餐具的滅菌與消毒等。由于戊二醛本身的內(nèi)在毒性以及使用不當(dāng)而造成的健康危害時(shí)有發(fā)生。它對皮膚、粘膜與呼吸道有刺激、對部分人群有致敏作用，并可引發(fā)氣喘和炎性或纖維性肺病。此外，戊二醛在畜牧品方面所造成的生產(chǎn)和環(huán)境安全問題也很嚴(yán)重。作為一種畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域常用的高效消毒劑，戊二醛在防治畜牧養(yǎng)殖常見病害的同時(shí)也造成了環(huán)境污染。殘留在土壤中的戊二醛不僅抑制了病原微生物生長，有益微生物的繁殖和生長也受到影響。該成

血吸蟲病至今仍是嚴(yán)重危害人類身體健康的一種重要人獸共患寄生蟲病。由218 于缺乏有效的預(yù)防血吸蟲感染的疫苗，治療手段局限于德國的怡黙克與拜耳藥廠 在 20 世紀(jì) 70 年代合作研發(fā)的廣譜抗蠕蟲藥吡喹酮。由于大規(guī)模使用，已經(jīng)出現(xiàn) 吡喹酮耐藥株流行的情況，給全世界的血吸蟲病防治帶來嚴(yán)重的困難與挑戰(zhàn)。 癸氧喹酯由英國 May—Baker 公司在 20 世紀(jì) 60 年代研制成功，主要作用是 阻礙球蟲子孢子的發(fā)育,預(yù)防雞的變位、柔嫩、巨型、堆型、毒害和布氏艾耳美 球蟲等引起的球蟲病。該藥物存在毒性低、治療效果好等顯著特點(diǎn)，是全球唯一 被日本、歐盟、美國、中國等國家和地區(qū)批準(zhǔn)使用的化學(xué)合成抗球蟲藥。 本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)癸氧喹酯衍生物 DQ1 具有較好的體外抗日本血吸 蟲活性，在 10 μM 下，72 小時(shí)后，100%的血吸蟲死亡，顯示出較好的血吸蟲病 治療前景，可以作為新型的抗血吸蟲病獸藥，獲得國家專利授權(quán)一項(xiàng) （ZL201510889423.8），發(fā)表研究論文一篇（Chinese Chemical Letters.2017, 28, 1547–1552）。

癌癥已成為公眾健康的重大殺手，每年因癌癥死亡的人數(shù)接近1000萬，傳統(tǒng)的放療、化療由于過高的毒副作用，外科手術(shù)部位有限而難以有效治療，靶向藥物的發(fā)展極大推動(dòng)了腫瘤治療，然而也存在易產(chǎn)生耐藥性等問題。免疫療法作為新興的腫瘤治療策略，具有精準(zhǔn)打擊、低毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點(diǎn)逐步受到關(guān)注，其中溶瘤病毒能夠選擇性在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制而不破壞正常細(xì)胞，因而具有很大的應(yīng)用前景（詳細(xì)內(nèi)容見前期推送科普系列——溶瘤病毒腫瘤治療）。目前許多溶瘤病毒以實(shí)體瘤為治療靶標(biāo)，而應(yīng)用于血液腫瘤的成功案例卻很少。近日，吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院于湘暉課題組在國內(nèi)主辦的SCI雜志Signal Transduction and Targeted Therapy上在線發(fā)文，題為“Enhancing the antitumor activity of an engineered TRAIL-coated oncolytic adenovirus for treating acute myeloid leukemia”，該研究構(gòu)建了表達(dá)TRAIL融合蛋白的溶瘤腺病毒，與人參皂苷Rh2聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)選擇性殺傷血液腫瘤，為白血病的治療提供了新思路。急性髓系白血病（AML）是髓系造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞的惡性病變，原始細(xì)胞異常增生、分化。盡管一線治療、鞏固化療的方案能夠完全緩解許多患者病癥，但是仍有部分患者無明顯療效，還有一些患者存在復(fù)發(fā)情況，亟需新的治療方式。之前的研究中，研究者曾構(gòu)建了表面展示腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）的腺病毒，能夠結(jié)合腫瘤表面死亡受體DR4和DR5，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，減弱病毒肝臟趨向性。為了更好評估病毒載體的感染與復(fù)制造成的影響，研究者通過流式細(xì)胞儀分析了病灶內(nèi)分離的AML細(xì)胞上的TRAIL受體（死亡受體DR4/5、誘餌受體DcR1/2）和腺病毒受體（CAR、整合素 αvβ3 和整合素αvβ5），發(fā)現(xiàn)多數(shù)表達(dá)中等水平TRAIL受體，培養(yǎng)細(xì)胞系也有類似現(xiàn)象，而正常粒細(xì)胞、T細(xì)胞這兩類受體表達(dá)很低，因此選擇TRAIL表面展示腺病毒能夠較好進(jìn)行靶向治療。研究者為構(gòu)建溶瘤腺病毒，通過將腺病毒A3衣殼蛋白IX插入“拉鏈結(jié)構(gòu)”，使得TRAIL能夠與“拉鏈結(jié)構(gòu)”偶聯(lián)展示在衣殼蛋白表面。由于只有約17%的衣殼蛋白連接上了TRAIL，研究者試圖采用新的策略：在大腸桿菌中表達(dá)可溶性TRAIL-“拉鏈結(jié)構(gòu)”融合蛋白，再將可溶性的蛋白與病毒粒子孵育，離心后分離表面覆蓋可溶性TRAIL的腺病毒粒子。通過變性凝膠電泳、高效液相色譜、斑點(diǎn)雜交等證實(shí)了改造的腺病毒zA4載有活性更高的TRAIL。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也證明zA4相較于原來的版本A3、A4侵染能力、特異性顯著提高。細(xì)胞結(jié)合試驗(yàn)用于評估侵染活性，證明了攜帶TRAIL顯著促進(jìn)了腺病毒的內(nèi)吞；定量PCR試驗(yàn)用于評估病毒復(fù)制能力，zA4在癌細(xì)胞中復(fù)制顯著強(qiáng)于其他載體。為有效評估zA4載體抗白血病活性，在不同感染復(fù)數(shù)下以不同載體侵染培養(yǎng)AML細(xì)胞系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)zA4顯著誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡。對臨床分離原代AML細(xì)胞深入探究，zA4顯著抑制了大部分AML細(xì)胞的增殖，然而值得注意的是，少部分不表達(dá)死亡受體的細(xì)胞無明顯變化。溶瘤病毒能否在體內(nèi)發(fā)揮作用直接決定了其是否具有臨床價(jià)值，基于之前的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，研究者對皮下移植造模小鼠注射了腺病毒載體，發(fā)光成像和病毒基因組分析均證實(shí)了載體腫瘤組織靶向性。zA4處理小鼠顯著抑制腫瘤生長，正常器官組織形態(tài)學(xué)、生化特征均未變化，因此未產(chǎn)生肝損傷。同時(shí)還觀察到凋亡重要因子caspase-3水平顯著上調(diào)。在更加真實(shí)的小鼠白血病模型中，也觀察到相似的結(jié)果，病毒在腫瘤消失后也并不會(huì)長時(shí)間存在。然而總有一些原代AML細(xì)胞TRAIL表達(dá)量很低，影響zA4的效果。聯(lián)系之前的研究，人參皂苷Rh2能夠誘導(dǎo)白血病細(xì)胞死亡受體表達(dá)和細(xì)胞毒性，研究者就試圖通過Rh2增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。通過IC50測定、信號通路分析證實(shí)了存在協(xié)同效應(yīng)，在細(xì)胞、小鼠水平上都得到了證實(shí)，兩者聯(lián)合使用促進(jìn)白血病腫瘤的凋亡。該研究通過優(yōu)化載體結(jié)構(gòu)、聯(lián)合用藥等方式增強(qiáng)了溶瘤腺病毒的活性，拓寬了溶瘤病毒的潛在適應(yīng)癥范圍，后續(xù)深入的分子機(jī)制探究以及療效的評估將有助于為白血病治療開辟新的道路。

項(xiàng)目背景：老年癡呆癥（AD）患者海馬和新皮質(zhì)的乙酰膽堿 (acetylcholine，Ach)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)顯著減少，Ach 由 ChAT 合成，皮質(zhì)膽堿能神經(jīng)元遞質(zhì)功能紊亂被認(rèn)為是記憶障 礙及其他認(rèn)知功能障礙的原因之一。Meynert 基底核是新皮質(zhì)膽 堿能纖維的主要來源，AD 早期此區(qū)膽堿能神經(jīng)元減少，是 AD 早 期損害的主要部位，出現(xiàn)明顯持續(xù)的 Ach 合成不足;ChAT 減少也 與癡呆的嚴(yán)重性、老年斑數(shù)量增多及杏仁核和腦皮質(zhì)神經(jīng)原纖維 纏結(jié)的數(shù)量有關(guān)。但對此觀點(diǎn)尚有爭議。AD 患者腦內(nèi)毒蕈堿 M2 受體和煙堿受體顯著減少，M1 受體數(shù)相對保留，但功能不全， 與 G 蛋白第二信使系統(tǒng)結(jié)合減少;此外，也累及非膽堿能遞質(zhì)， 如 5-羥色胺(serotonin，5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)減少 50%， 生長抑素(somatostatin)、去甲腎上腺素(norepinephrine)及 5-HT 受體、谷氨酸受體、生長抑素受體均減少，但這些改變?yōu)?原發(fā)或繼發(fā)于神經(jīng)元減少尚未確定。給予乙酰膽堿前體如膽堿或 卵磷脂和降解抑制劑毒扁豆堿，或毒蕈堿拮抗藥直接作用于突觸 后受體，并未見改善。 所需技術(shù)需求簡要描述：1.研發(fā)一種能補(bǔ)充后改善神經(jīng)遞質(zhì) 代謝的藥物，延緩老年癡呆病。2.開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證以上 理論和藥物。  對技術(shù)提供方的要求:團(tuán)隊(duì)在老年癡呆癥領(lǐng)域有較強(qiáng)研究基 礎(chǔ)，能協(xié)助企業(yè)確認(rèn)發(fā)病原理，并聯(lián)合研發(fā)改善神經(jīng)遞質(zhì)代謝藥 物。