一種光控RNA標記新技術
研究開發(fā)了 “ 熒光團輔助的 RNA 鄰近標記和測序技術 ” ,簡稱 “CAP-seq” 。 該方法通過可見光激發(fā)遺傳靶向的光敏蛋白 miniSOG 產(chǎn)生活性氧, 介 導鄰近 RNA 分子上的鳥嘌呤與具有生物正交功能把手的氨基探針進行共價交聯(lián),既而通過富集純化與高通量測序檢測,實現(xiàn) miniSOG 定位的亞細胞區(qū)域內(nèi) 轉(zhuǎn)錄 組的空間特異性標記與鑒定。 利用 CAP-seq ,他們系統(tǒng)研究了幾個亞細胞區(qū)域的轉(zhuǎn)錄組,包括線粒體基質(zhì)轉(zhuǎn)錄組 、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表面 轉(zhuǎn)錄組 以及 線粒體外膜附近轉(zhuǎn)錄組。這些研究結(jié)果表明 CAP-seq 對 活細胞中開放區(qū)域的 RNA 標記具有良好的空間特異性和覆蓋度 。 他們在線粒體外膜附近檢測到 30 個編碼氧化磷酸化途徑相關蛋白的 RNA 和多達 55 個編碼核糖體蛋白的 mRNA ,這一結(jié)果不僅支持了線粒體蛋白在線粒體外膜被翻譯后直接轉(zhuǎn)運進線粒體的模型,還暗示著線粒體功能可能與蛋白質(zhì)的翻譯調(diào)節(jié)有關。 CAP-seq 具有操作簡單、空間選擇性高、生物相容性好的特點,將成為一項適合于在多種生物系統(tǒng)中研究亞細胞 轉(zhuǎn)錄組 的新技術。
北京大學
2021-04-11