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本課題研發(fā)用于海洋環(huán)境（海水及水產(chǎn)品）中病毒、致病菌等病 原微生物、重點(diǎn)針對(duì)可能引起人類疾病的細(xì)菌和病毒（如總桿菌數(shù)、 大腸桿菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球 菌、腺病毒、腸道病毒、甲肝病毒、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌、沙門氏 菌及李斯特菌）快速檢測(cè)的分子生物技術(shù)，為研制用于這些微生物的 現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)手段和設(shè)備奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。檢測(cè)方法采用基因芯片檢 測(cè)、蛋白質(zhì)檢測(cè)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)三種

本課題研發(fā)用于海洋環(huán)境（海水及水產(chǎn)品）中病毒、致病菌等病原微生物、重點(diǎn)針對(duì)可能引起人類疾病的細(xì)菌和病毒（如總桿菌數(shù)、大腸桿菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌、腺病毒、腸道病毒、甲肝病毒、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌、沙門氏菌及李斯特菌）快速檢測(cè)的分子生物技術(shù)，為研制用于這些微生物的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)手段和設(shè)備奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。檢測(cè)方法采用基因芯片檢測(cè)、蛋白質(zhì)檢測(cè)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)三種。

本發(fā)明提出一種秸稈還田纖維分解性生防真菌及菌劑和應(yīng)用，其中該菌株F7JX993849的分類命名為綠木霉Trichoderma?virens，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC?No.3.17613。本發(fā)明的綠木霉Trichoderma?virens?F7JX993849對(duì)農(nóng)作物秸稈中的纖維素、半纖維素和果膠組分同時(shí)具有較強(qiáng)的分解能力。其次，本發(fā)明的綠木霉Trichoderma?virens?F7JX993849可以拮抗植物病源菌入侵，具有生物防治功能。再次，本發(fā)明的秸稈還田纖維分解性生防真菌所制成的菌劑，可以解決一般秸稈腐熟劑在應(yīng)用過(guò)程中效果不理想、不穩(wěn)定的問(wèn)題，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

該成果獲 2013 年度教育部科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)， 2017 年國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)。成果探明了我國(guó)食源性彎曲菌、沙門菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌和副溶血性弧菌在全產(chǎn)業(yè)鏈的定量流行病學(xué)新特征，創(chuàng)建了其快速定性、定量檢測(cè)新技術(shù)，菌種庫(kù)和分子溯源數(shù)據(jù)庫(kù)以及定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系，建立了風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型和軟件，定量評(píng)估了雞肉彎曲菌污染對(duì)我國(guó)人群的健康風(fēng)險(xiǎn)；創(chuàng)制了新型消毒制劑、有機(jī)酸和低溫控制技術(shù)和新型系列防控疫苗等病原菌干預(yù)技術(shù)，形成了覆蓋產(chǎn)業(yè)鏈全程的食源性病原菌集成防控技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)了傳播和風(fēng)險(xiǎn)的有效防控。

本發(fā)明涉及一種海帶內(nèi)生真菌及其在制備生物活性提取物方面的應(yīng)用，所述海帶內(nèi)生真菌的菌種保藏信息為：保藏單位名稱：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期：2018年1月2日；保藏編號(hào)：CGMCC No.15181；分類命名：鏈格孢Alternaria sp.W-1。

本發(fā)明涉及一種海洋真菌發(fā)酵提取物及其作為抗老年癡呆藥物的應(yīng)用，所述提取物由如下步驟制備：(1)在無(wú)菌條件下，將海洋真菌Alternaria sp.W?1接種到PD液體培養(yǎng)基中，恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)，溫度為25?30℃，搖床轉(zhuǎn)速為150?180r/min，培養(yǎng)時(shí)間為2?4d，得種子液；(2)將步驟(1)得到的種子液接種到察氏培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基pH為4.0?8.0，接種量為5?20％，培養(yǎng)溫度為22?34℃，培養(yǎng)時(shí)間為6?14d，得發(fā)酵物；(3)將步驟(2)得到的發(fā)酵物用3?5層無(wú)菌紗布過(guò)濾，得濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，用乙酸乙酯萃取2?4次，合并有機(jī)相，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮即得所述提取物。

機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)高濃度優(yōu)選化合物MW5破壞真菌細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生ROS進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡，低濃度MW5能破壞藥物外排泵MDR1功能，進(jìn)而增加氟康唑胞內(nèi)濃度進(jìn)而逆轉(zhuǎn)其耐藥性。

成果描述：項(xiàng)目針對(duì)豬雞病原菌耐藥性導(dǎo)致細(xì)菌病難防控、用藥量大、產(chǎn)品藥殘的關(guān)鍵技術(shù)難題，取得了重大理論和方法創(chuàng)新成果。 項(xiàng)目揭示了我國(guó)近12年豬雞病原細(xì)菌耐藥性變化規(guī)律，建立菌種庫(kù)和耐藥數(shù)據(jù)庫(kù)，創(chuàng)立了5種細(xì)菌耐藥基因分子檢測(cè)新方法；改進(jìn)了7種動(dòng)物專用抗生素及其制劑的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量；創(chuàng)制了非生素免疫增強(qiáng)劑4種。獲國(guó)家2類新獸證書(shū)6個(gè)，3類2個(gè)。獲國(guó)家發(fā)明專利12項(xiàng)，實(shí)用新型專利1項(xiàng)。主編參編專著6部，發(fā)表論文123篇，包括本專業(yè)權(quán)威SCI論文AAC(IF:4.672)，JAC(IF:4.659)等35篇。成果應(yīng)用使豬雞抗生素用量減少30%-70%，細(xì)菌病降低50%，節(jié)省用藥成本30%，為有效控制豬雞細(xì)菌感染及耐藥，減少抗生素使用，保障公共衛(wèi)生和食品安全提供了新的理論和技術(shù)。市場(chǎng)前景分析：應(yīng)用領(lǐng)域：本項(xiàng)目的應(yīng)用領(lǐng)域主要為獸藥、疫苗生產(chǎn)企業(yè)以及大中型豬雞養(yǎng)殖生產(chǎn)企業(yè)。可共同企業(yè)合作開(kāi)發(fā)新型獸藥、生物制品等，同時(shí)也可為大中型豬雞養(yǎng)殖生產(chǎn)企業(yè)提供技術(shù)支撐，有效降低抗生素的使用，保障產(chǎn)品安全，打造高品質(zhì)放心品牌。市場(chǎng)需求：豬雞細(xì)菌性疾病嚴(yán)重危害公共衛(wèi)生和食品安全，如豬鏈球菌、豬雞沙門氏菌引起人感染發(fā)病的公共衛(wèi)生事件。在規(guī)模化養(yǎng)殖條件下，細(xì)菌性疾病呈多發(fā)趨勢(shì)如大腸桿菌等，畜禽因細(xì)菌性疾病致死或生產(chǎn)性能下降等造成全國(guó)年直接經(jīng)濟(jì)損失400億元（畜牧業(yè)年鑒2010）。病原細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性是致細(xì)菌疾病難控治、用藥量大（每年畜禽抗生素原料藥用量多達(dá)10萬(wàn)噸）、產(chǎn)品藥殘高的關(guān)鍵技術(shù)難題，如近年來(lái)出現(xiàn)耐多種抗生素的結(jié)核桿菌、金黃葡萄球菌、大腸桿菌等“超級(jí)耐藥菌”，引起了極大關(guān)注。本項(xiàng)目通過(guò)產(chǎn)學(xué)研結(jié)合12年聯(lián)合攻關(guān)，創(chuàng)立了細(xì)菌耐藥基因的分子檢測(cè)新方法，揭示了細(xì)菌耐藥性變化規(guī)律，創(chuàng)新了耐藥性控制理論和應(yīng)用技術(shù)，并在安全高效新獸藥研發(fā)中得到廣泛應(yīng)用（圖1），可為保障我國(guó)豬雞養(yǎng)殖健康、公共衛(wèi)生和產(chǎn)品安全提供了有力的科技支撐，其市場(chǎng)需求極大。與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：“該項(xiàng)目已在國(guó)內(nèi)多個(gè)省市規(guī)模化豬場(chǎng)，雞場(chǎng)、示范區(qū)、飼料廠、獸藥廠等進(jìn)行了推廣應(yīng)用，成果應(yīng)用效益顯著。研究成果豐富了病原菌耐藥基因的基礎(chǔ)理論研究，為病原菌的耐藥性分子檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了新的技術(shù)手段，項(xiàng)目選題技術(shù)路線合理，研究手段先進(jìn)，數(shù)據(jù)可靠，結(jié)果可信，具有先進(jìn)性、創(chuàng)新性和實(shí)用性的特點(diǎn)。其成果總體水平居國(guó)內(nèi)領(lǐng)先、國(guó)際先進(jìn)，部分成果處于國(guó)際領(lǐng)先水平”。

水是生命得以存在的必要條件，它使我們?nèi)祟惖靡苑毖苌ⅲ?類的生活、生產(chǎn)、娛樂(lè)都離不開(kāi)水。它同時(shí)也是許多病原微生物滋生、 傳播的場(chǎng)所和載體，這些病原微生物一旦進(jìn)入人體則將可能使人患病、 甚至導(dǎo)致死亡，嚴(yán)重威脅著人類健康。隨著社會(huì)的發(fā)展和生活水平的 提高，人們?cè)絹?lái)越關(guān)心自身的健康問(wèn)題，而各種水體（包括生活飲用水，江河湖泊，游泳場(chǎng)館等）的安全問(wèn)題也日益成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。 因此，為了保護(hù)人們的身體健康，對(duì)各種水體尤其是飲用水中病原微 生物的檢測(cè)是十分必要和亟需的。本項(xiàng)目旨在建立水體中主要病原微 生物特異分子標(biāo)識(shí)庫(kù)，并以此為基礎(chǔ)建立快速檢測(cè)技術(shù)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)包 括生活飲用水在內(nèi)的各種水體中主要病原微生物（致病性細(xì)菌和原生 動(dòng)物等）的迅速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，為人們的用水安全和水質(zhì)狀況的評(píng)估 提供依據(jù)。 應(yīng)用價(jià)值： 根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)及 WHO、USEPA 和歐盟的相關(guān)規(guī) 定，確定芯片的檢測(cè)范圍為 12 種細(xì)菌、1 種鉤端螺旋體和 2 種原生 蟲(chóng)：金黃色葡萄球菌，嗜肺軍團(tuán)菌，糞腸球菌，屎腸球菌，肺炎克雷 伯氏菌，銅綠假單胞菌，親水氣單胞，大腸桿菌/志賀氏菌，小腸結(jié)腸 炎耶爾森氏菌，霍亂弧菌，副溶血弧菌，沙門氏菌，鉤端螺旋體，賈 第鞭毛蟲(chóng)，隱孢子蟲(chóng)。

課題進(jìn)展按計(jì)劃進(jìn)行，完成了240株檢測(cè)范圍內(nèi)和檢測(cè)范圍外近緣菌株的收集；對(duì)29株軍團(tuán)菌、17株鉤端螺旋體和32株克雷伯的靶基因序列破譯和序列分析；完成了探針篩選及終型芯片點(diǎn)制；進(jìn)行了105份模擬樣品的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)；進(jìn)行了芯片判讀系統(tǒng)Bactarray軟件的初步開(kāi)發(fā)；初步建立了芯片生產(chǎn)質(zhì)量控制體系；課題組額外進(jìn)行了嗜肺軍團(tuán)菌3，6，13型的O抗原破譯，并完成了其序列分析；申請(qǐng)發(fā)明專利2項(xiàng)，發(fā)表SCI 論文2篇。