非編碼RNA的染色質結合機制研究
哺乳動物基因組的廣泛轉錄產生了大量的非編碼RNA,相比于細胞質定位的蛋白編碼mRNA,這些非編碼RNA如長鏈非編碼RNA(lncRNA)、啟動子和增強子關聯的不穩定轉錄本(uaRNA、eRNA)等更傾向于結合染色質參與調控染色質結構、轉錄和RNA加工等過程。盡管零星報導少數RNA核滯留的現象,但為何大部分lncRNA會滯留于染色質上行使調控功能,仍是個不解之謎。上世紀80年代初,Joan Steitz通過系統性紅斑狼瘡患者血液抗體分離提取 U1,U2, U4, U5和U6小核糖核蛋白粒子(又稱為 snRNP),揭示了它們參與RNA剪接的經典功能。近年來施一公團隊系統報導了真核生物剪切體的原子結構和生化功能。然而,一直讓人困惑的是,細胞內U1 snRNP的數量為什么比其它剪接相關snRNP高 2-5倍。雖然Gideon Dreyfuss和Phil Sharp等團隊曾揭示U1 snRNP調控轉錄終止和方向的非經典功能,U1 snRNP在細胞中的豐富存在仍然是一個讓人困惑的問題。為了探究lncRNA的染色質結合機制,研究者首先建立和運用一套新穎的mutREL-seq方法來高精度篩選調控RNA定位的關鍵序列,意外發現了U1 snRNP識別位點參與調控候選RNA的染色質滯留。相比于蛋白編碼基因,lncRNA轉錄本含有更多的U1識別位點(同時也是潛在的5’剪接供體位點),而其基因組區域具有更少的3’剪接受體位點。并且U1 snRNP更高水平地結合在lncRNA上。隨后,研究者分別使用antisense morpholino oligos(AMO)和auxin-induced degron(AID)誘導蛋白降解系統,來抑制U1 snRNA和核心蛋白組分SNRNP70的功能。研究者發現小鼠胚胎干細胞中近一半的lncRNA受U1 snRNP調控。另外,與轉錄調控元件關聯的不穩定非編碼轉錄本如uaRNA、eRNA等,它們的染色質結合在U1 snRNP抑制后也顯著下降。研究者進一步證明了U1 snRNP直接調控成熟lncRNA與染色質的結合,而不是通過影響RNA合成、加工或降解過程的動態變化所產生的間接影響。機制上,研究者鑒定了U1 snRNP在染色質上的互作蛋白,發現U1 snRNP結合特定磷酸化狀態的RNA轉錄聚合酶II(Pol II)。轉錄抑制明顯降低了U1 snRNP及其所調控的非編碼RNA與染色質的結合,表明U1 snRNP通過與磷酸化的Pol II互作來介導其互作RNA與染色質的結合。最后,研究者通過以lncRNA Malat1為例,進一步驗證了U1 snRNP對其染色質結合的調控作用。去除SNRNP70后,絕大部分Malat1 “核斑”定位信號消失,并彌散在核質及細胞質中。同時,Malat1在活躍表達基因染色質區域的結合信號顯著下降,表明U1 snRNP不僅可以將Malat1滯留在染色質上,同時也參與調控后者在染色質上的移動及其與靶基因的結合。綜上,研究者提出如下模型(圖1):5’和3’剪接位點在lncRNA上的不對稱分布,致使U1 snRNP持續結合在lncRNA轉錄本上,而不能通過RNA剪接過程釋放,從而介導了lncRNA的染色質滯留。磷酸化Pol II進一步介導了lncRNA-U1 snRNP復合體在染色質上的移動(mobilization)。對于大多數低豐度、不穩定的lncRNA,它們只能靶向結合鄰近的染色質區域(順式cis作用);而對于少數穩定和高豐度的lncRNA,如Malat1,U1 snRNP促進了其遷移和結合更多的靶基因區域(反式trans作用)。圖1. U1 snRNP介導非編碼RNA染色質結合的模式圖。論文鏈接:https://www.nature.com/articles/s41586-020-2105-3
清華大學
2021-04-10