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成果描述：本課題采用理性設(shè)計(jì)的策略，通過(guò)基因重組的手段構(gòu)建雜合抗菌肽LfcinB-P-CB，具有活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)對(duì)抗菌肽工程菌發(fā)酵優(yōu)化，及抗菌肽純化、制劑工藝研究，建立中試規(guī)模的抗菌肽制劑的制備體系?？咕Ч_(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；實(shí)現(xiàn)雜合抗菌肽LfcinB-P-CB在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，解決抗生素等化學(xué)抗菌材料造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題，降低某些物質(zhì)會(huì)以原型或代謝物形式排泄造成環(huán)境污染使環(huán)境中出現(xiàn)耐菌株的可能性，從而給人類(lèi)生存環(huán)境構(gòu)成危害。市場(chǎng)前景分析：據(jù)國(guó)外報(bào)道，歐洲各國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)、養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)禽場(chǎng)無(wú)一例外普遍在配合飼料中添加了上述獸用抗生素作為“動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑”。泰洛星已成為當(dāng)今世界上頭號(hào)獸用抗菌劑，去年泰洛星的銷(xiāo)售額高達(dá)2.75億美元。我國(guó)當(dāng)前的動(dòng)物養(yǎng)殖面臨越來(lái)越嚴(yán)峻的疫病困擾，因此抗菌肽產(chǎn)品在動(dòng)物保健方面的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用在我國(guó)需求巨大。2010年全國(guó)動(dòng)物用抗菌肽類(lèi)產(chǎn)品年銷(xiāo)售額接近一億元，但抗菌肽的總市場(chǎng)容量至少超過(guò)100億。因此本項(xiàng)目開(kāi)發(fā)的抗菌肽具有廣闊的市場(chǎng)前景。與同類(lèi)成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；

本發(fā)明公開(kāi)了一種地衣芽孢桿菌分泌的抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQIDNO.1所示，分子量為1290.4道爾頓，等電點(diǎn)5.23。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中地衣芽孢桿菌分泌的的抗菌肽，利用陰離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開(kāi)發(fā)制備飼用抗菌藥物。

已有樣品/n獸用抗菌藥和違禁藥殘留高效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)制定與產(chǎn)品創(chuàng)制?！　〕晒?jiǎn)介：動(dòng)物性食品中的獸藥殘留危害消費(fèi)者健康，檢測(cè)是避免殘留的有效措施。然而，多年來(lái)，我國(guó)獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的覆蓋面窄、科技含量不高、不配套、檢測(cè)效率低，不能滿(mǎn)足國(guó)家保障食品安全的戰(zhàn)略需求。在國(guó)家重點(diǎn)支撐、農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修定等計(jì)劃支持下，歷時(shí)19年，本項(xiàng)目著力于畜禽和水產(chǎn)動(dòng)物可食組織及產(chǎn)品的樣品前處理技術(shù)的系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化研究，抗原、抗體、工作菌種及培養(yǎng)基等快速檢測(cè)核心試劑及試劑盒的創(chuàng)制與開(kāi)發(fā)，重要?dú)埩魳?biāo)識(shí)物標(biāo)準(zhǔn)品的自主研制，取得以下創(chuàng)

本發(fā)明提供了一種新型魚(yú)源抗菌肽moronecidin突變體及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)生物軟件對(duì)魚(yú)源抗菌肽moronecidin的氨基酸序列進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)分析，將其22個(gè)氨基酸中的2處氨基酸進(jìn)行突變(K7R和V20K)，同時(shí)為了保證抗菌肽C末端的酰胺化，在C末端添加了天冬酰胺N，獲得一種新型魚(yú)源抗菌肽突變體，使其抗菌效力獲得顯著提高。在此基礎(chǔ)上，選用畢赤酵母偏愛(ài)密碼子，人工合成新型魚(yú)源抗菌肽moronecidin突變體基因，克隆于畢赤酵母中表達(dá)，獲得新型抗菌肽重組酵母菌株，并將發(fā)酵規(guī)模放大到發(fā)酵罐水平，實(shí)現(xiàn)抗菌肽產(chǎn)品的高密度發(fā)酵和高效表達(dá)。發(fā)酵液進(jìn)一步純化后可制成粉劑、液體等抗菌肽制劑用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑或水產(chǎn)動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療制劑。

本發(fā)明提供了一種新型豬源抗菌肽突變體及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)生物軟件對(duì)豬源抗菌肽PMAP37的氨基酸序列進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)分析，將其37個(gè)氨基酸中的3處氨基酸進(jìn)行突變（L6K、K20L和L31K），獲得一種新型豬源抗菌肽突變體，使其抗菌效力獲得顯著提高。在此基礎(chǔ)上，選用畢赤酵母偏愛(ài)密碼子，人工合成新型豬源抗菌肽突變體基因，克隆于畢赤酵母中表達(dá)，獲得新型抗菌肽重組酵母菌株，并將發(fā)酵規(guī)模放大到發(fā)酵罐水平，實(shí)現(xiàn)抗菌肽產(chǎn)品的高密度發(fā)酵和高效表達(dá)。發(fā)酵液進(jìn)一步純化后可制成粉劑、液體等抗菌肽制劑用于畜禽疾病的預(yù)防和治療。

本發(fā)明公開(kāi)了一種牡蠣粉祛農(nóng)殘抗菌材料的制備方法與使用方法，其以牡蠣殼為原料通過(guò)二級(jí)階梯式升溫煅燒并輔以通風(fēng)降溫法制得熟料，熟料經(jīng)磨機(jī)粉磨至粒徑為50um以下的粉體，從而制得具有疏松多孔結(jié)構(gòu)和高化學(xué)活性的牡蠣殼粉體;其用于祛農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留的使用方法簡(jiǎn)單、安全高效、無(wú)二次污染無(wú)產(chǎn)生。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有成本低、節(jié)能綠色環(huán)保等特點(diǎn)，環(huán)保、使用安全、高效、適于各類(lèi)水果和疏菜的凈洗處理，可有效祛除附著在其表面上的農(nóng)藥成分殘留，并殺滅大腸桿菌。

本發(fā)明公開(kāi)了一種海藻酸鹽-石墨烯-納米氧化亞銅復(fù)合抗菌纖維的制備方法，其通過(guò)將石墨烯加入至銅鹽溶液制得混合溶液A;然后，按體積比5-9:1-5，將上述混合溶液A加入到海藻酸鈉水溶液巾，并加入葡萄糖或抗壞血酸作還原劑，反應(yīng)得到海藻酸鈉-石墨烯-納米氧化亞銅凝膠，再經(jīng)負(fù)壓除泡、靜置、陳化得到紡絲液，然后成膜、凝固成形，并經(jīng)水洗、熱拉定幅、烘干，即得成品。本發(fā)明的制備方法所制得的海藻酸鹽-石墨烯-納米氧化亞銅復(fù)合抗菌纖維，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)均勻一致，納米氧化亞銅粒徑可控，具有很好的吸水性和透氣性能;適于用作生產(chǎn)功能性紡織品和功能性無(wú)紡布，具有廣闊的市場(chǎng)前景。

研發(fā)階段/n本成果針對(duì)獸用抗菌藥物殘留和動(dòng)物源產(chǎn)品安全等問(wèn)題，建立了三種能同時(shí)快速檢測(cè)動(dòng)物可食性組織或尿中五類(lèi)抗菌藥物(青霉素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氨基苷類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)〉殘留的微生物學(xué)方法一抗菌藥物殘留快速拭子檢測(cè)法(FAST)、現(xiàn)場(chǎng)拭子檢測(cè)法(STOP)和活體拭子檢測(cè)法(LAST)，各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定。以上述方法為基礎(chǔ)研制出相應(yīng)的三種試劑性能指標(biāo)與國(guó)際上同類(lèi)試劑盒相當(dāng)，與儀器分析法(HPLC)具有良好的相關(guān)性。經(jīng)多家單位的復(fù)核和應(yīng)用證明，三種試劑盒的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度能滿(mǎn)足獸藥殘

針對(duì)再生水中氮、磷、有害病菌難以同步去除問(wèn)題，以天然沸石為載體，對(duì)其進(jìn)行鹽-熱復(fù)合改性，負(fù)載鑭氧化物，再載入無(wú)機(jī)抗菌離子，賦予沸石同步脫氮除磷抗菌功能，為再生水處理提供重要技術(shù)支撐。氨氮初始濃度為 8mg/L、總磷濃度為 1mg/L、大腸桿菌濃度為 104cfu/L，復(fù)合水處理材料投加量為 2g/L，攪拌 3h 后，其脫氮率達(dá)到 99.2％，總磷和大腸桿菌均未能檢出，吸附飽和材料可多次進(jìn)行再生利用。

一種提高四針狀氧化鋅晶須抗菌性能的方法，其步驟是：A、將外觀(guān)為白色粉狀的四針狀氧化鋅晶須加入到酒石酸鉀鈉的水溶液中形成糊狀或懸濁液，攪拌10～30分鐘，所述的酒石酸鉀鈉和四針狀氧化鋅晶須的摩爾比為0.1～1∶100，；再在攪拌狀態(tài)下緩慢加入與酒石酸鉀鈉等摩爾量氯化銅的水溶液；之后，繼續(xù)攪拌30～60分鐘；最后，經(jīng)過(guò)濾、洗滌、烘干，得表面原位沉積有納米酒石酸銅的四針狀氧化鋅晶須復(fù)合物粉末；B、將復(fù)合物粉末在氫氣氣氛中升溫至270～300℃保溫15～60分鐘，冷卻至室溫，即得。該方法得到的粉末抗菌力強(qiáng)，4小時(shí)殺菌率為98.5％～99.9％；且成本低廉，使用中不變色、易于推廣。