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本試驗(yàn)通過石蠟切片技術(shù)對(duì)湘軍金魚性腺組織進(jìn)行切片觀察，發(fā)現(xiàn)9月齡的雄性湘軍金魚精巢中有大量的成熟精子，11月齡的雌性湘軍金魚卵巢中有成熟卵子。 一、項(xiàng)目進(jìn)展 創(chuàng)意計(jì)劃階段 二、負(fù)責(zé)人及成員 姓名 學(xué)院/所學(xué)專業(yè) 入學(xué)/畢業(yè)時(shí)間 洪迪珊 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物科學(xué) 2018/2022 陳雨薇 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物技術(shù) 2018/2022 劉雨欣 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物科學(xué) 2019/2023 馬彤彤 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物科學(xué) 2019/2023 黃志嫻 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物科學(xué) 2018/2022 三、指導(dǎo)教師 姓名 學(xué)院/所學(xué)專業(yè) 職務(wù)/職稱 研究方向 劉少軍 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/魚類遺傳育種 教授 魚類遺傳育種 王余德 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/魚類遺傳育種 講師 魚類遺傳育種 四、項(xiàng)目簡(jiǎn)介 為探究湘軍金魚的胚胎發(fā)育過程、能育性、倍性以及Chordin A基因在湘軍金魚的雙尾性狀形成過程中的作用，本試驗(yàn)通過石蠟切片技術(shù)對(duì)湘軍金魚性腺組織進(jìn)行切片觀察，發(fā)現(xiàn)9月齡的雄性湘軍金魚精巢中有大量的成熟精子，11月齡的雌性湘軍金魚卵巢中有成熟卵子。試驗(yàn)通過PHA體內(nèi)誘導(dǎo)腎細(xì)胞制片法對(duì)湘軍金魚染色體數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)其染色體數(shù)目為100條。試驗(yàn)通過PCR技術(shù)獲得了Chordin A基因全長(zhǎng)，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Chordin A基因全2634 bp，其中堿基A共618個(gè)，占比23.46%、堿基C共692個(gè)，占比26.27%、堿基G共756個(gè)，占比28.70%、堿基共568個(gè)，占比21.56%。堿基“G+C”占比 54.97%，堿基“A+T”占比45.03%。試驗(yàn)對(duì)湘軍金魚不同組織進(jìn)行Chordin A基因的熒光定量PCR試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Chordin A基因在尾鰭表達(dá)量最高。項(xiàng)目成員在進(jìn)行科學(xué)探究的同時(shí)深挖湘軍金魚經(jīng)濟(jì)價(jià)值，項(xiàng)目組成員多次赴雙峰縣、龍?zhí)镦?zhèn)玉坪村等地進(jìn)行實(shí)地調(diào)研,我們發(fā)現(xiàn)觀賞魚行業(yè)是朝陽行業(yè)，發(fā)展迅猛；與此同時(shí)湖南省休閑漁業(yè)來勢(shì)喜人，但是觀賞魚普遍魚病高發(fā)，變異物種破壞生態(tài)等問題。本項(xiàng)目借助湘軍金魚這一優(yōu)質(zhì)魚種，通過互聯(lián)網(wǎng)+農(nóng)副產(chǎn)品的銷售模式，變單一銷售模式為多形式利益聯(lián)合，拉動(dòng)當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)增長(zhǎng)。我們與村落達(dá)成了長(zhǎng)期合作的關(guān)系。湘軍金魚作為優(yōu)質(zhì)觀賞魚備受消費(fèi)者青睞。

可以量產(chǎn)/n該項(xiàng)目屬于作物標(biāo)記輔助育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及利用抗除草劑基因的油菜化學(xué)殺雄制種方法。本發(fā)明的特征包括培育耐受化學(xué)殺雄劑的父本材料和無遮擋的化學(xué)殺雄步驟。利用化學(xué)誘變劑誘變甘藍(lán)型油菜種子，在5-6葉期噴施除草劑苯磺隆，初步篩選得到抗除草劑的突變體材料，自交得到穩(wěn)定遺傳的抗除草劑油菜突變體株系，提取油菜突變體株系基因組DNA，擴(kuò)增得到BnaAHAS1和BnaAHAS3基因片段，其中BnaAHAS3基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，在該基因BnaAHAS3第536bp處存在一個(gè)

中試階段/n該項(xiàng)目提供一種評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻水生環(huán)境安全性的方法，包括如下步驟：轉(zhuǎn)基因稻田和非轉(zhuǎn)基因稻田布置和管理；稻田水層和淤泥中外源蛋白的測(cè)定，包括樣本預(yù)處理和外源蛋白的抽提和測(cè)定；稻田水層中浮游生物的分離，包括水樣采集、沉淀分離浮游生物；稻田水層中浮游生物種類和豐度的測(cè)定，包括活體鑒定和數(shù)量計(jì)數(shù)；轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻的種植對(duì)浮游生物的安全性評(píng)價(jià)，利用分析軟件對(duì)浮游生物種類、數(shù)量、發(fā)生時(shí)期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出多樣性指數(shù)、均勻性指數(shù)等參數(shù)，并和常規(guī)稻田進(jìn)行比較，從而對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻水生環(huán)境安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

可以量產(chǎn)/n由于香石竹是乙烯敏感植物，在其采后貯藏運(yùn)輸期間需花費(fèi)大量的人力物力進(jìn)行保鮮處理。傳統(tǒng)的保鮮方法多采用含有乙稀抑制劑(如AVG、GVG、AOA)和乙稀拮抗劑(如AgNO3、STS、2,5-NBD)的保鮮劑，或是利用冷藏、氣調(diào)等措施，不僅成本高，效果也不盡人意，且易造成環(huán)境污染。本成果運(yùn)用轉(zhuǎn)基因沉默理論，通過基因工程的方法抑制香石竹內(nèi)源乙烯的生物合成，從而達(dá)到延長(zhǎng)香石竹自然保鮮期的目的，進(jìn)而達(dá)到有效調(diào)節(jié)貯運(yùn)和香石竹市場(chǎng)供應(yīng)之目的。技術(shù)水平：利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得了瓶插壽命明顯延長(zhǎng)的香石竹切花'M

研發(fā)階段/n基于基因組定點(diǎn)編輯分子育種新技術(shù)及其配套軟件?！　〕晒?jiǎn)介：本成果含有完整的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)，我們對(duì)基因組編輯技術(shù)切割活性和脫靶效應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化，開發(fā)了完整的sgRNA設(shè)計(jì)，sgRNA表達(dá)載體構(gòu)建，細(xì)胞或在體水平基因組打靶和脫靶檢測(cè)等技術(shù)。提高基因組定點(diǎn)打靶效率和降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)，為基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)植物分子育種打開了新的局面。本成果擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基因組編輯技術(shù)配套軟件，其適用于針對(duì)不同物種基因組設(shè)計(jì)和篩選活性高，特異性強(qiáng)的sgRNA用于動(dòng)植物分

全面開發(fā)了生脈散抑制 ras 原癌基因過表達(dá)中 的新用途，具體涉及在制備抑制 ras 原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)牛APAF1基因隱性致死突變的方法，涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明方法基于焦磷酸測(cè)序技術(shù)，采用一對(duì)擴(kuò)增引物、一條通用引物和一條測(cè)序引物，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1、2、3、4所示，對(duì)牛5號(hào)染色體63150400bp位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛APAF1基因野生型純合子在C堿基處有峰，T堿基處無峰；而致死突變攜帶者在C堿基與T堿基處均有峰。本發(fā)明提供的方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)，通量高，檢測(cè)成本低，可快速檢測(cè)APAF1基因隱性致死突變攜帶者的個(gè)體，在牛的育種過程中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明公開了蛋白質(zhì)nog1在調(diào)控植物產(chǎn)量和/或穗粒數(shù)中的應(yīng)用。所述蛋白質(zhì)nog1為氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；所述產(chǎn)量為單株產(chǎn)量；所述穗粒數(shù)為主莖穗粒數(shù)。實(shí)驗(yàn)證明，向Guichao 2中導(dǎo)入抑制所述蛋白質(zhì)nog1表達(dá)的物質(zhì)，得到轉(zhuǎn)基因植物乙；與Guichao 2相比，轉(zhuǎn)基因植物乙的單株產(chǎn)量減少和/或主莖穗粒數(shù)減少。將編碼蛋白質(zhì)nog1的核酸分子導(dǎo)入SIL176中，得到轉(zhuǎn)基因植物甲；與SIL176相比，轉(zhuǎn)基因植物甲的單株產(chǎn)量增加和/或主莖穗粒數(shù)增加。因此，蛋白質(zhì)nog1對(duì)調(diào)控水稻產(chǎn)量和穗粒數(shù)具有非常重要的作用。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:本發(fā)明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP及其在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用.本發(fā)明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動(dòng)子序列,然后利用Gateway技術(shù)構(gòu)建重組植物表達(dá)載體pKGWFS7TCSP,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化,以表達(dá)GUS基因的方式進(jìn)行啟動(dòng)子活性功能驗(yàn)證.本發(fā)明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動(dòng)子TCSP,并驗(yàn)證了其活性,對(duì)于揭示茶樹咖啡堿合成的機(jī)理,生物調(diào)控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.

高溫、低溫和鹽堿脅迫已成為限制作物生產(chǎn)和植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因子。本項(xiàng)目歷時(shí)14年，以重要作物棉花和模式植物擬南芥為材料，將基因挖掘、機(jī)理探索與利用緊密結(jié)合，分離鑒定了多個(gè)溫度和高鹽脅迫應(yīng)答基因、高效特異表達(dá)啟動(dòng)子及基因表達(dá)調(diào)控元件，探討了其調(diào)控機(jī)制，為作物遺傳改良提供了新基因資源和理論支撐。①發(fā)現(xiàn)了高溫誘導(dǎo)的miRNA可變剪切新機(jī)制，探討了低溫脅迫下GhDREB1與激素的調(diào)控關(guān)系，為闡明植物應(yīng)答溫度脅迫的分子機(jī)理提供了新證據(jù)。②解析了GhZFP1、GhMT3a和GhNHX1等基因在植物高鹽脅迫適應(yīng)中通過調(diào)節(jié)Na+積累和清除活性氧發(fā)揮作用，為作物抗逆品種改良提供了重要基因資源。③發(fā)掘并鑒定了植物組織特異高效啟動(dòng)子和調(diào)控元件，闡明了核基質(zhì)結(jié)合序列在提高遺傳轉(zhuǎn)化效率和轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平方面的作用，為植物遺傳轉(zhuǎn)化提供了有效表達(dá)載體。本成果在Molecular Cell等國內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物發(fā)表論文71篇，其中SCI論文62篇；總影響因子235，影響因子5以上論文15篇，單篇最高影響因子15.28，他引總計(jì)2227次。高溫誘導(dǎo)的miRNA可變剪切闡明了環(huán)境脅迫與植物miRNA加工的調(diào)控關(guān)系，是本領(lǐng)域研究的重大發(fā)現(xiàn)，在國內(nèi)外產(chǎn)生了較大影響，為提升我國在該領(lǐng)域研究的國際影響力發(fā)揮了積極作用。