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1 成果簡介本項(xiàng)成果針對目前全球共同關(guān)心的腫瘤、傳染病、內(nèi)分泌等重大疾病快速檢測問題，建立相關(guān)疾病診斷所需的高靈敏度化學(xué)發(fā)光免疫分析新方法，研制了一系列可用于臨床分析的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒。 所建立的方法操作簡單，線性范圍寬，成本低，可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的樣品調(diào)查和篩選。本項(xiàng)成果包括基于磁顆粒的多種標(biāo)志物的快速聯(lián)合檢測技術(shù)，研制高通量、 快速臨床診斷試劑盒和全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的關(guān)鍵裝置。可以實(shí)現(xiàn)腫瘤、傳染病、內(nèi)分泌等系列化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑的產(chǎn)業(yè)化。研究成果已部分應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。2 應(yīng)用說明微板式磁化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（ MMCLEIA）方法。以磁性微粒子為載體，采用磁性微粒子表面包被技術(shù)和免疫反應(yīng)的特點(diǎn)，以磁性酶免疫測量分析為模型，建立了微板式磁化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法。能夠較好地應(yīng)用于血清以及尿液中不同生物標(biāo)記物成分的分析。 用改良的戊二醛交聯(lián)法完成堿性磷酸酶（ ALP） 對抗體的標(biāo)記，所得酶結(jié)合物保持了單克隆抗體的免疫反應(yīng)性和酶的催化活性。 采用 4-甲氧基-4-（ 3"-磷酰氧基苯） -螺旋-（ 1， 2-二氧雜環(huán)丁烷-3， 2'-金剛烷（ AMPPD） -堿性磷酸酶（ ALP） 化學(xué)發(fā)光體系，并以異硫氰酸熒光素（ FITC） 和 ALP 分別標(biāo)記疾病標(biāo)記物的單克隆抗體。在溶液中形成 FITC 標(biāo)記抗體-抗原-ALP 標(biāo)記抗體的免疫夾心復(fù)合物后，引入偶聯(lián) FITC 抗體的微米級磁性微粒子作為反應(yīng)體系的分散固相，并最終形成雙夾心免疫復(fù)合物。在反復(fù)施加磁場的作用下，通過洗滌將沒有結(jié)合的游離蛋白與免疫復(fù)合物分離，實(shí)現(xiàn)對待測抗原的測定。 這一技術(shù)可以應(yīng)用于腫瘤標(biāo)記物的檢測。3 效益分析化學(xué)發(fā)光免疫分析由于其高靈敏度、快速、高通量等特點(diǎn)，可以應(yīng)用于生物樣品的快速檢測，在臨床檢測、環(huán)境分析以及食品安全分析等領(lǐng)域一直受到人們的重視。本研究成果及專利技術(shù)均從實(shí)際需要出發(fā)，不需要繁雜的樣品前處理，就可以更方便地檢測出人體或者環(huán)境生物樣品中相關(guān)物質(zhì)的含量，這種技術(shù)可以用于日常生產(chǎn)和生活中，對人類和動物的身體健康、維持全球生態(tài)平衡等方面具有很大的意義。微板式磁性微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析新技術(shù)的開發(fā)不僅為腫瘤、傳染病等重大疾病診斷與預(yù)防提供強(qiáng)有力的檢測工具，對于發(fā)展其他疾病診斷技術(shù)和環(huán)境雌激素類化合物的檢測也將起到重要作用。因此化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的發(fā)展拓寬了免疫分析的應(yīng)用領(lǐng)域，具有廣闊的市場前景和非常可觀的經(jīng)濟(jì)效益。4 合作方式技術(shù)轉(zhuǎn)讓或合作開發(fā)， 商談。5 所屬行業(yè)領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生。

宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，在女性人群中HPV的感染率在13.5%左右。分子診斷是指應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)。免疫診斷（immunodiagnosis）是應(yīng)用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態(tài)。但現(xiàn)有單克隆抗體均無法達(dá)到HPV亞型鑒別目的，若干亞型特異性抗體均與其它亞型有交叉反應(yīng)。迄今為止市場上沒有高危型HPV免疫診斷試劑盒。因此我們開發(fā)的HPV免疫診斷試劑盒有望成為第一個高危HPV免疫檢測試劑盒。

HPV (Human Papilloma Virus) 是人乳頭瘤病毒的縮寫，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為尋常疣、生殖器疣等癥狀。 隨著

研發(fā)階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進(jìn)行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數(shù)均達(dá)到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎(chǔ)，在國內(nèi)首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗(yàn)證明，該試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性與國外試劑盒水平相當(dāng)。經(jīng)多家檢測機(jī)構(gòu)和研究單位的復(fù)核和應(yīng)用表明，該試劑盒

利用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法對傳統(tǒng)抗血清制備技術(shù)進(jìn)行改造，突破 了過去抗血清生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)為主造成的不確定性和不系統(tǒng)性，提高了抗血 清制備的技術(shù)含量和生產(chǎn)效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體， 從而實(shí)現(xiàn)抗體制備的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化生產(chǎn)，同時也降低了生產(chǎn)成本。 免疫磁珠分離技術(shù)的最突出的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，可以明顯提高檢 測的靈敏性，縮短病原體的檢測時間一至數(shù)天，并且可從復(fù)雜的樣品 中直接分離病原體，降低標(biāo)本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產(chǎn)出 3 種診斷血清產(chǎn)品，包括“致病性大腸桿菌 O 抗原診 斷血清試劑盒”、“大腸桿菌 H 抗原全套診斷血清試劑盒”和“志賀氏菌 O 抗原全套診斷血清試劑盒”，共計 147 種高特異性抗體。 經(jīng)中 國 CDC 使用證實(shí)，該血清具有反應(yīng)速度快、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，與日 本生研同類血清質(zhì)量相當(dāng)，遠(yuǎn)優(yōu)于國內(nèi)同類產(chǎn)品。 繼續(xù)在市場調(diào)研的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行 11 種改類試劑盒的研發(fā)和生 產(chǎn)，填補(bǔ)國內(nèi)外市場空白。 本項(xiàng)目完成后，實(shí)施單位將可生產(chǎn) 12 種診斷血清試劑盒（包括 前期已完成開發(fā)的 3 種），按每個疾控中心每年需求每種試劑盒一套 計算，總需求量約 1200 套。此外，進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫單位對某些種類 的血清亦有一定需求，約為 300 套。按每套試劑盒平均 1 萬元的售價 計算，每年的市場可達(dá) 1500 萬元。 免疫磁珠分離試劑盒可廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)，食品檢驗(yàn)，水質(zhì)／ 環(huán)境檢驗(yàn)，獸藥檢驗(yàn)等，市場非常之大，現(xiàn)主要的生產(chǎn)商為國外的 Dynal 和 Matrix 公司，以 Dynal 公司為例，其每年可創(chuàng)造數(shù)十億美元 的銷售額。由于依賴進(jìn)口，國內(nèi)多家疾病預(yù)防控制和出入境檢驗(yàn)檢疫 單位已經(jīng)向項(xiàng)目實(shí)施單位提出了產(chǎn)品的開發(fā)意向。該產(chǎn)品研發(fā)成本約 為每毫升 600 元，銷售價格在每毫升 2000 元左右，顯示了良好的市 場前景。

利用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法對傳統(tǒng)抗血清制備技術(shù)進(jìn)行改造，突破了過去抗血清生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)為主造成的不確定性和不系統(tǒng)性，提高了抗血清制備的技術(shù)含量和生產(chǎn)效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體，從而實(shí)現(xiàn)抗體制備的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化生產(chǎn)，同時也降低了生產(chǎn)成本。 免疫磁珠分離技術(shù)的最突出的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，可以明顯提高檢測的靈敏性，縮短病原體的檢測時間一至數(shù)天，并且可從復(fù)雜的樣品中直接分離病原體，降低標(biāo)本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產(chǎn)出3種診斷血清產(chǎn)品，包括“致病性大腸桿菌O抗原診斷血清試劑

該儀器是我們自主研發(fā)的具有完全知識產(chǎn)權(quán)的一款新產(chǎn)品，適用于生物化學(xué)發(fā)光、免疫發(fā)光分析等研究工作，能夠自動檢測任何標(biāo)準(zhǔn)96 微孔板。產(chǎn)品可應(yīng)用于醫(yī)院臨床檢驗(yàn)、試劑公司生化發(fā)光試劑盒測試、高校院所生物醫(yī)學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)教學(xué)、質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫部門樣品檢測等，具有廣闊的應(yīng)用市場。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 儀器所用試劑是開放的，可應(yīng)用任何一家公司的試劑來檢測； 可實(shí)現(xiàn)全部微孔檢測或者任選微孔檢測，檢測方式十分靈活； 使用高靈敏光電器件，噪音低、靈敏度高，可達(dá)10-18mol ATP/孔； 動態(tài)范圍大，跨度可達(dá)8 個數(shù)量級； 可選配精準(zhǔn)可靠的自動加液、沖洗模塊； 對各種酶標(biāo)板，如平底板、圓底板、錐形底板等都能得到準(zhǔn)確的結(jié)果； 分析軟件功能全面，既可以提供原始發(fā)光值、也可以通過輸入校準(zhǔn)參數(shù)提供最終樣品濃度含量，還為試劑開發(fā)提供發(fā)光動力學(xué)分析等功能； 建有后臺數(shù)據(jù)庫，可存放EXCEL 格式數(shù)據(jù)，也可以存儲檢測報告照片； 具有獨(dú)特的光阱系統(tǒng)，防止光信號交叉干擾。

"該儀器是我們自主研發(fā)的具有完全知識產(chǎn)權(quán)的一款新產(chǎn)品，適用于生物化學(xué)發(fā)光、免疫發(fā)光分析等研究工作，能夠自動檢測任何標(biāo)準(zhǔn)96 微孔板。產(chǎn)品可應(yīng)用于醫(yī)院臨床檢驗(yàn)、公司試劑盒研發(fā)測試、高校院所生物醫(yī)學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)教學(xué)、質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫部門樣品檢測等，具有廣闊的市場前景。產(chǎn)品特點(diǎn)：1. 儀器所用試劑是開放的，可應(yīng)用任何一家公司的試劑來檢測；2. 可實(shí)現(xiàn)全部微孔檢測或者任選微孔檢測，檢測方式十分靈活；3. 配套相關(guān)試劑，可實(shí)現(xiàn)肝炎、心梗、腫瘤等重大疾病標(biāo)志物的高靈敏檢測，靈敏度接近進(jìn)口大型生化分析儀；4.可任選自發(fā)熒光模塊或激發(fā)熒光模塊，能夠自動檢測標(biāo)準(zhǔn)96孔板，可任選孔檢測；5.具有獨(dú)特的光阱系統(tǒng)，防止光信號交叉干擾。6.可選配精準(zhǔn)可靠的自動加液、沖洗模塊；7.已完成原理樣機(jī)，可靠運(yùn)行幾千次。8.建有后臺數(shù)據(jù)庫，可存放EXCEL 格式數(shù)據(jù)，也可以存儲檢測報告照片。可應(yīng)用于醫(yī)院臨床檢驗(yàn)、試劑公司生化發(fā)光試劑盒測試、高校院所生物醫(yī)學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)教學(xué)、質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫部門樣品檢測。 "

研發(fā)階段/n本成果所制備的金霉素抗體對金霉素具有很高的特異性，可對動物源食品中金霉素的殘留量進(jìn)行專一檢測和判定。樣品處理不需要過柱凈化，處理步驟簡單、實(shí)用，特別適合基層檢驗(yàn)檢疫單位使用。樣品處理較現(xiàn)有儀器簡單、靈敏、省時。本成果經(jīng)過靈敏度、精密度、特異性等質(zhì)控項(xiàng)目測定各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到國家相關(guān)技術(shù)要求。技術(shù)水平：專利技術(shù)（國家發(fā)明專利授權(quán)號：ZL2005100863473）應(yīng)用前景：本成果用于對金霉素殘留的檢測具有良好的應(yīng)用前景，可以在較短時間內(nèi)檢測大量樣品，排除大量陰性樣品，同時樣品處理既簡單、省時、省

"團(tuán)隊(duì)通過自主知識產(chǎn)權(quán)的專利技術(shù)首次誘導(dǎo)了能夠特異性識別高危型HPV病毒的特異性抗體。基于該抗體，團(tuán)隊(duì)研發(fā)了高危型HPV免疫診斷試劑盒，通過膠體金試紙和ELISA試劑盒檢測受試者的宮頸分泌物，從而快速便捷的判斷受試者是否感染高危型HPV。 團(tuán)隊(duì)已開發(fā)了以10C9為代表的一系列特異性識別高危型HPV的單克隆抗體，具有極高的靈敏度與特異性。基于這一序列的特異性抗體，完成了高危型HPV特異性抗體的研制，并組裝成試劑盒，目前正在進(jìn)行臨樣本檢測和靈敏度優(yōu)。 該技術(shù)目前國際上無同類產(chǎn)品，屬于國際原始創(chuàng)新。研究成果已經(jīng)申請了1項(xiàng)國內(nèi)專利和兩項(xiàng)國際專利，在基于免疫的快速診斷高危HPV感染上具有革命性突破。"