肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是全球第五大常見的消化道惡性腫瘤,也是全球第三大致死性癌癥。我國(guó)肝癌病發(fā)率位居全球首位,肝癌已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康和生命的疾病。由于肝癌的早期診斷缺乏可靠的生物標(biāo)志物,肝癌患者通常在肝癌晚期才被診斷,其5年生存率僅為15%。目前肝癌診斷主要依賴于影像學(xué)檢查或者血液活檢中的甲胎蛋白(AFP)標(biāo)志物等手段。但這些傳統(tǒng)方法對(duì)于癌變?cè)缙诖嬖诿舾行缘汀⑻禺愋缘偷染窒扌裕纾夯顧z中的甲胎蛋白特異性差,且往往到癌癥晚期才能檢測(cè)到其含量升高,可能延誤最佳的治療時(shí)機(jī)。因此亟需找到一種可用于肝癌診斷及預(yù)后的可靠的新型液體活檢標(biāo)志物。 液體活檢為一門新型的檢測(cè)技術(shù),越來(lái)越受到關(guān)注。目前可以作為無(wú)創(chuàng)檢測(cè)的生物標(biāo)志物大多數(shù)是蛋白質(zhì)分子和DNA分子,但這些標(biāo)志物在靈敏度、誤診率和經(jīng)濟(jì)成本高等方面的缺陷導(dǎo)致它們很難被普及。RNA分子在細(xì)胞中擁有多個(gè)拷貝并且存在多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控形態(tài),可以更加準(zhǔn)確地反映細(xì)胞狀態(tài)和癌癥動(dòng)態(tài)發(fā)展過程,而且其檢測(cè)成本也很低。 過去體液中的RNA標(biāo)志物研究主要集中在miRNA等小RNA的研究,相對(duì)于細(xì)胞中大量的長(zhǎng)RNA,miRNA的數(shù)量要少一個(gè)到兩個(gè)數(shù)量級(jí),因此提供的信息也有限。本項(xiàng)目另辟蹊徑,通過對(duì)大量肝癌患者(HCC)、慢性乙型肝炎患者(CHB)和健康個(gè)體(HD)進(jìn)行血漿中非編碼RNA表達(dá)譜的高通量測(cè)序檢測(cè)和分析,發(fā)現(xiàn)了一種非編碼RNA,srpRNA (RN7SL1),的功能結(jié)構(gòu)域可以穩(wěn)定存在于血液中,并在區(qū)分肝癌患者和陰性對(duì)照組時(shí)具有良好的敏感度和特異性(約90%)。并且,通過在獨(dú)立驗(yàn)證集上的實(shí)時(shí)熒光定量檢驗(yàn)(RT-qPCR),該srpRNA (RN7SL1)的功能結(jié)構(gòu)域被證明在 肝癌的診斷及預(yù)后方面都具有可靠的臨床表現(xiàn)。
本項(xiàng)目首先構(gòu)建了一套完整且可靠地血漿RNA提取、建庫(kù)及數(shù)據(jù)分析方法,通過差異表達(dá)分析及RT-qPCR獨(dú)立驗(yàn)證的方法找到了可以用于肝癌早期診斷及預(yù)后的新型標(biāo)志物 (非編碼RNA分子的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)域),可應(yīng)用于開發(fā)高敏感度及特異性的肝癌血漿早期檢測(cè)試劑盒。
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