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本發(fā)明公開了一種小麥抗穗發(fā)芽基因TaZFP18,所述基因包含如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列,或包含與SEQ?ID?NO.1序列互補(bǔ)的核苷酸序列,該基因編碼CCCH型鋅指蛋白18,可作為小麥穗發(fā)芽抗感品種的分子標(biāo)記基因.該小麥抗穗發(fā)芽基因TaZFP18為一種新的小麥抗穗發(fā)芽主效基因,利用其開發(fā)分子標(biāo)記,可以迅速鑒定小麥?zhǔn)欠駷樗氚l(fā)芽抗性品種,也為小麥穗發(fā)芽抗性育種提供了新的基因資源.

研發(fā)階段/n這是免疫性狀相關(guān)基因?qū)＠ㄟ^本專利的應(yīng)用，在豬育種中可以提高豬的免疫力和抗病力，節(jié)約醫(yī)藥成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。

本發(fā)明公開了一種端粒酶啟動基因表達(dá)方法(Telomerase?Activating gene Expression，Tage)及其應(yīng)用，該表達(dá)方法基于端粒酶可結(jié)合并延長DNA分子末端的端粒酶識別序列，合成新的端粒重復(fù)序列的特性，將端粒酶特有的生物學(xué)功能與人工轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控細(xì)胞基因表達(dá)技術(shù)相結(jié)合，發(fā)展了Tage新方法。Tage技術(shù)在細(xì)胞中可以有效發(fā)生，人工轉(zhuǎn)錄因子可激活效應(yīng)基因在端粒酶陽性細(xì)胞中的表達(dá)，效應(yīng)基因的表達(dá)產(chǎn)物可有效殺滅腫瘤細(xì)胞，本發(fā)明證明Tage技術(shù)可用于殺滅腫瘤細(xì)胞，而對無端粒酶活性的細(xì)胞

01.成果簡介 CRISPR/Cas9是細(xì)菌在長期演化過程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)。其工作原理是crRNA通過堿基配對與tracrRNA結(jié)合形成tracrRNA/crRNA復(fù)合物，此復(fù)合物引導(dǎo)核酸酶cas9蛋白在與crRNA配對的序列靶位點(diǎn)剪切雙鏈DNA。經(jīng)過研究，通過人工設(shè)計(jì)tracrRNA/crRNA，改造形成具有引導(dǎo)作用的sgRNA，可以引導(dǎo)Cas9蛋白在多種細(xì)胞的特定基因組位點(diǎn)上進(jìn)行切割、修飾，并最終實(shí)現(xiàn)基因突變、插入或缺失。因此，CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基因編輯技術(shù)領(lǐng)域。 近年來，CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)在真核生物和原核生物中得到了廣泛的應(yīng)用。在大腸桿菌等革蘭氏陰性菌中，用一個載體表達(dá)cas9基因，同時由于革蘭氏陰性菌重組效率低，需要在這個載體上表達(dá)λ-RED重組酶；在另一個載體中表達(dá)sgRNA和用于同源重組的同源臂序列。兩個載體都轉(zhuǎn)入大腸桿菌中時，sgRNA介導(dǎo)Cas9蛋白切割基因組上特定序列，形成雙鏈斷裂，刺激同源重組的發(fā)生，從而實(shí)現(xiàn)基因編輯。 本項(xiàng)成果構(gòu)建了適用于鹽單胞菌的基于CRISPR/Cas9的基因編輯系統(tǒng)。該系統(tǒng)由兩個載體組成：第一個載體表達(dá)Cas9基因，且不需要表達(dá)λ-RED重組酶，實(shí)際操作中不再需要誘導(dǎo)λ-RED重組酶的表達(dá)，簡化了步驟流程；第二個載體表達(dá)sgRNA，并含有用于同源重組的同源臂序列。從而實(shí)現(xiàn)了基因編輯。本項(xiàng)成果的技術(shù)優(yōu)勢包括： （1）基因編輯時間由原有的20余天縮短到7-8天； （2）N個基因編輯時間由原有的N個月縮短到3+5N天； （3）無需表達(dá)λ-RED重組酶。                        圖1 鹽單胞菌TD01進(jìn)行基因編輯的流程示意圖02.應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可作為CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)的載體，廣泛應(yīng)用于基因編輯領(lǐng)域。03.知識產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請1項(xiàng)發(fā)明專利。04.團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)目為多團(tuán)隊(duì)合作項(xiàng)目，其中一個團(tuán)隊(duì)的負(fù)責(zé)人為清華大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，長江學(xué)者特聘教授，國家杰出青年基金獲得者。主要研究方向?yàn)楹铣缮飳W(xué)、微生物代謝工程、生物材料、工業(yè)生物技術(shù)。已發(fā)表國內(nèi)外高水平學(xué)術(shù)論文數(shù)十篇，申請專利70余項(xiàng)。05.合作方式 投融資。06.聯(lián)系方式郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

1. 痛點(diǎn)問題 紅球菌是具有高抗逆性（耐有機(jī)溶劑、耐高溫、耐酸堿）的特殊放線菌，日本30年前首先使用紅球菌高效催化丙烯腈水合生產(chǎn)丙烯酰胺——其聚合產(chǎn)物廣泛用于石油開采、水處理、土壤改良劑等領(lǐng)域——迄今為止仍是工業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域最成功的案例之一。開發(fā)紅球菌基因編輯方法，一方面可以實(shí)現(xiàn)紅球菌細(xì)胞自身性能的按需調(diào)控（如敲除副產(chǎn)物基因），解決丙烯酰胺、丙烯酸銨等酰胺、羧酸類大宗/精細(xì)化學(xué)品生產(chǎn)中的高成本和高排放問題，另一方面有望以紅球菌細(xì)胞為普適性宿主，高表達(dá)各種外源功能酶，從而實(shí)現(xiàn)重組紅球菌全細(xì)胞催化技術(shù)的普遍應(yīng)用，尤其是解決手性醫(yī)藥中間體現(xiàn)有制備工藝中路線長、工藝復(fù)雜、原子經(jīng)濟(jì)性差、環(huán)境污染嚴(yán)重等各種主要問題。但是，作為一種革蘭氏陽性放線菌，紅色紅球菌存在基因組中GC含量高、基因轉(zhuǎn)化率低、非法重組嚴(yán)重等問題，基因組改造困難。目前紅色紅球菌基因組改造主要依賴于自殺質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組，但自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率和單交換成功率很低，正確編輯率更低。因此，迫切需要開發(fā)高效的紅球菌基因組編輯工具。 2. 解決方案 本技術(shù)核心成果是一種基于CRISPR（成簇規(guī)律間隔短回文序列）-Cas9（DNA剪切蛋白）技術(shù)的紅色紅球菌基因組高效編輯方法。該技術(shù)通過紅色紅球菌特有啟動子及質(zhì)粒元件，首先實(shí)現(xiàn)了Cas9蛋白在紅色紅球菌中的表達(dá)及切割功能；其次成功規(guī)避了紅球菌的限制修飾系統(tǒng)，將紅色紅球菌基因轉(zhuǎn)化效率提高了80多倍；接下來，又通過紅球菌重組酶的引入，顯著提高了外源基因在紅色紅球菌中的同源重組效率，最終率先成功建立紅色紅球菌的CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)，不僅可以實(shí)現(xiàn)基因組上目標(biāo)基因的敲除、替換和改造，也可實(shí)現(xiàn)多個基因的同時敲除以及無痕疊加敲除，為紅球菌全細(xì)胞催化平臺技術(shù)開發(fā)及其在化學(xué)品綠色先進(jìn)制造中的應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。 合作需求 開展合作開發(fā)、技術(shù)許可等，尋求有志于生物制藥、生物合成、石油開采、日化洗滌等不同應(yīng)用領(lǐng)域進(jìn)行紅球菌全細(xì)胞催化法生產(chǎn)目標(biāo)產(chǎn)品的企業(yè)合作，尤其是在上述不同領(lǐng)域具有生產(chǎn)和銷售優(yōu)勢或經(jīng)驗(yàn)的企業(yè)。

研發(fā)階段/n基于基因組定點(diǎn)編輯分子育種新技術(shù)及其配套軟件。　　成果簡介：本成果含有完整的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)，我們對基因組編輯技術(shù)切割活性和脫靶效應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化，開發(fā)了完整的sgRNA設(shè)計(jì)，sgRNA表達(dá)載體構(gòu)建，細(xì)胞或在體水平基因組打靶和脫靶檢測等技術(shù)。提高基因組定點(diǎn)打靶效率和降低脫靶風(fēng)險，為基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)應(yīng)用于動植物分子育種打開了新的局面。本成果擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因組編輯技術(shù)配套軟件，其適用于針對不同物種基因組設(shè)計(jì)和篩選活性高，特異性強(qiáng)的sgRNA用于動植物分

本實(shí)用新型涉及電子儀器領(lǐng)域，具體涉及基于 STM32 的便攜式數(shù)字示波器，包括殼體，殼體內(nèi)設(shè) 置的 PCB 板，以及殼體上設(shè)置的電容觸摸屏；PCB 板上設(shè)置有示波器系統(tǒng)；示波器系統(tǒng)連接電容觸摸 屏。該示波器采用 STM32F407 和其內(nèi)核 cortex-M4 為測量和控制核心，以高性能的 AD、FIFO、壓控放 大器、高性能運(yùn)算放大器、高低頻比較器、高性價比鋰電池等為主要器件，以高清的電容式觸摸屏作為 顯示工具和控制工具，具有性能好、價格低、

        我國精神疾病發(fā)病率高且增長趨勢明顯，是我國推進(jìn)國民大健康戰(zhàn)略所面臨的巨大挑戰(zhàn)。然而當(dāng)前精神疾病臨床診斷缺乏發(fā)病機(jī)制的依據(jù)，主要以臨床表型為指標(biāo)。多數(shù)精神疾病的發(fā)病原因與人體基因新發(fā)突變相關(guān)，這種不在父代而僅在子代發(fā)生的基因變異對精神疾病的臨床診療極具重要性。         研發(fā)團(tuán)隊(duì)建立了從患者新發(fā)突變基因組學(xué)到轉(zhuǎn)錄組、蛋白組學(xué)的完整生物組學(xué)發(fā)病機(jī)制臨床輔助診斷系統(tǒng)，填補(bǔ)了精神疾病臨床診斷的組學(xué)機(jī)制評價空白，系統(tǒng)自動生成輔助診斷報告和用藥風(fēng)險分析，具有顯著的臨床應(yīng)用價值，符合領(lǐng)域發(fā)展的國際行業(yè)趨勢，具有巨大的市場推廣潛力。         意向開展成果轉(zhuǎn)化的前提條件：中試放大及產(chǎn)業(yè)化工藝開發(fā)資金支持

可以量產(chǎn)/n該成果屬于基因表達(dá)分析技術(shù)領(lǐng)域，公開了CmEF1α基因和CmRAN基因在分析甜瓜果實(shí)的基因表達(dá)時作為內(nèi)參基因的應(yīng)用，本發(fā)明還公開了一種采用實(shí)時熒光定量PCR分析甜瓜果實(shí)基因表達(dá)的方法，它是將CmEF1α基因和CmRAN基因組合的幾何平均數(shù)作為甜瓜果實(shí)基因表達(dá)分析中的內(nèi)參基因。CmEF1α基因和CmRAN基因在不同坐果方式的甜瓜果實(shí)的不同發(fā)育階段均能穩(wěn)定表達(dá)，是甜瓜果實(shí)發(fā)育過程中利用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測基因表達(dá)分析的可靠內(nèi)參基因組合。該成果具有可靠性和實(shí)用性，能夠顯著提

本發(fā)明公開了蛋白質(zhì)nog1在調(diào)控植物產(chǎn)量和/或穗粒數(shù)中的應(yīng)用。所述蛋白質(zhì)nog1為氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；所述產(chǎn)量為單株產(chǎn)量；所述穗粒數(shù)為主莖穗粒數(shù)。實(shí)驗(yàn)證明，向Guichao 2中導(dǎo)入抑制所述蛋白質(zhì)nog1表達(dá)的物質(zhì)，得到轉(zhuǎn)基因植物乙；與Guichao 2相比，轉(zhuǎn)基因植物乙的單株產(chǎn)量減少和/或主莖穗粒數(shù)減少。將編碼蛋白質(zhì)nog1的核酸分子導(dǎo)入SIL176中，得到轉(zhuǎn)基因植物甲；與SIL176相比，轉(zhuǎn)基因植物甲的單株產(chǎn)量增加和/或主莖穗粒數(shù)增加。因此，蛋白質(zhì)nog1對調(diào)控水稻產(chǎn)量和穗粒數(shù)具有非常重要的作用。