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一種提純大腸桿菌表達的重組黃曲霉尿酸氧化酶的方法
研發階段/n本發明公開了一種從高效表達的基因工程菌中提取重組黃曲霉尿酸氧化酶的方法。該菌是攜帶重組質粒的大腸桿菌Rosetta(DE3)，該重組質粒是含黃曲霉尿酸氧化酶uricase基因的質粒pET-30c(+)。用該菌生產黃曲霉尿酸氧化酶的方法包括四個步驟：A、工程菌發酵，累積胞內尿酸氧化酶；B、超聲波破胞，離心收集上清液（含可溶性尿酸氧化酶）；C、依次進行離子交換層析、疏水層析及凝膠過濾層析，收集活性峰；D、將活性峰冷凍干燥，即得高純度的重組黃曲霉尿酸氧化酶。本發明的優點：生產重組黃曲霉尿酸氧化
湖北工業大學
2021-01-12
氯吡格雷手性前體(R)-鄰氯扁桃酸甲酯的酶法制備
氯吡格雷 (Clopidogrel) ，商品名波立維 (Plavix) ，是抑制血小板聚集的藥物。年銷售額超 過百億美元，是目前世界上排名第二位的重磅炸彈級藥物。 (R)-鄰氯扁桃酸甲酯是氯吡格雷原料藥合成的重要前體化合物，酶促鄰氯苯甲酰甲酸甲酯 不對稱還原是制備 (R)-鄰氯扁桃酸甲酯的重要方法，具有轉化率高、產品光學純度好、環境污 染小等顯著優點。 本項目我們通過廣泛篩選，獲得一個高立體選擇性的羰基還原酶，將其與葡萄糖脫氫酶共 克隆表達于大腸桿菌中，使用重組大腸桿菌整細胞在單水相體系中高效催化鄰氯苯甲酰甲酸甲 酯的不對稱還原，使用廉價的葡萄糖作為輔底物，反應體系中無需額外添加價格昂貴的輔酶， 反應體系簡便，原料成本低廉。底物濃度可高達600 g/L，完全轉化，產物 (R)-鄰氯扁桃酸甲酯 的得率高于90%，光學純度高于99.9%。具有很好的產業化前景。
華東理工大學
2021-04-13
他汀側鏈(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的酶法制備
阿托伐他汀，又名立普妥，能夠降低血漿膽固醇和脂蛋白水平，是目前世界銷售排名首位 的重磅炸彈級藥物，年銷售額超過百億美元。 (S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯是阿伐他汀手性側鏈合成的重要前體化合物，酶促4-氯-乙酰乙酸 乙酯不對稱還原是制備 (S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的重要方法，具有轉化率高、產品光學純度 好、環境污染小等顯著優點。 本項目我們通過廣泛篩選，獲得一個高立體選擇性的羰基還原酶ScCR，該酶可以在有機 /水兩相體系中高效催化4-氯-乙酰乙酸乙酯的不對稱還原，使用廉價的異丙醇作為輔底物， 無需額外添加輔酶再生用酶，反應體系簡單。使用含該酶的大腸桿菌整細胞作為催化劑，底 物濃度可高達600 g/L，完全轉化，產物 (S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的得率達96%，光學純度高于 99%。具有很好的產業化前景。
華東理工大學
2021-04-13
東南大學張袁健團隊在納米酶催化機制方面取得重要研究成果
近日，東南大學化學化工學院、江蘇省富碳材料器件工程研究中心張袁健教授團隊（https://carbosensing.group）在Fe-N-C納米酶在催化抗壞血酸氧化反應中的機制研究取得進展，相關成果以“Insights into Iron Leaching from an Ascorbate-Oxidase-like Fe-N-C Nanozyme and Oxygen Reduction Selectivity”為題在化學領域國際權威學術期刊Angew. Chem. Int. Ed.以VIP Paper形式在線發表。
東南大學
2023-05-15
用于檢測甲睪酮的單克隆抗體及酶聯免疫技術與試劑盒
中試階段/n該項目公開了一種能識別甲睪酮的特異性單克隆抗體,它是由保藏號為CCTCCNO:C201493的雜交瘤細胞株MT9C10所分泌的。本發明還公開了一種檢測甲睪酮的酶聯免疫方法和試劑盒。與現有技術相比，本發明制備的單克隆抗體可以識別甲睪酮，識別靈敏度高，特異性好，本發明的ELISA方法和試劑盒檢測靈敏度、準確度高，精密度好。
華中農業大學
2021-01-12
一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的液體發酵方法
本發明公開了一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的液體發酵方法。包括如下步驟:1)從東海近海10～20m深處的泥土里篩選得到一株海洋黑曲霉;2)海洋黑曲霉接種于PDA培養基上,32～40℃下培養60～90小時,得到斜面孢子,斜面孢子保藏于4℃;3)斜面孢子接種于PDA-1培養基,在32～40℃下培養60～90h,得到活化的孢子;4)活化的孢子接種于茄子瓶斜面,42℃培養74小時,得到擴培的茄子瓶斜面孢子;5)擴培得到的茄子瓶斜面孢子用滅菌人工海水稀釋到108個孢子/ml,接種于液體發酵產酶培養基,發酵5～10天,得到纖維素酶。本發明具有產酶活高、酶穩定、耐鹽性好等優點,生產的纖維素酶可以在較高鹽含量的條件下降解纖維素,為該水解物的后續應用打下基礎。
浙江大學
2021-04-13
一類具酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法與用途
本發明提供一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，包括六種從桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物。通過將藥材經乙醇水溶液加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續分離，收集溶液，溶液濃縮干燥后得到樣品并進行結構鑒定。本發明還提供了從桑葉中分離上述多酚類化合物的方法。本發明提供的六種多酚類化合物具有較強的酪氨酸酶抑制活性，能夠有效預防和治療黑色素合成異常導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥，可用于制備治療此類疾病的藥物。
浙江大學
2021-04-13
鏡像組織研究法:一種本土管理學研究資源的開發思路
本土管理學的發展不僅需要理論創新,也需要研究方法的創新."鏡像組織研究法",擁有當前管理學主流實證方法中所不具備的刻畫心理活動等特點,運用這一研究方法存在著科學合理性和可行性.
長春大學
2021-04-30
一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法
本發明公開了一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法，其包括以下步驟：于增殖培養基上培養高度、粗度、生長勢達到嫁接要求的梨組培苗，選擇高2厘米至3厘米、生長健壯一致的組培苗，在無菌條件下，于頂部斜切去頭作為砧木；選擇與砧木生長勢相近的組培苗作為接穗，于基部斜切留梢；將砧木頂部斜切面和接穗基部斜切面緊密靠在一起，用塑料套管固定嫁接部位形成嫁接苗，再將嫁接苗接種于培養基中，在25℃±2℃，每天光照十二小時，
青島農業大學
2021-01-12
微生物發酵法生產長鏈多不飽和脂肪酸DHA和AA
DHA（Docosahexaenoic Acid，二十二碳六烯酸）是一種重要的長鏈多不飽和脂肪酸，屬ω-3系列，具有增強記憶，提高智力，降低血脂，調節免疫系統等功效。AA（Arachidonic acid，二十碳四烯酸/花生四烯酸）屬于ω-6系列長鏈多不飽和脂肪酸，在降血脂、抑制血小板聚集、抗炎癥、抗癌、抗脂質氧化、促進腦組織發育等方面具有獨特的生物活性。 全球范圍內，微生物油脂的應用已勢不可擋，聯合國糧農組織和世界衛生組織早在1995年推薦的膳食指南中明確規定，嬰兒配方奶粉中必須含有DHA，富含DHA和AA的微生物油脂已在美國、日本、英國、法國、新西蘭、澳大利亞、瑞士、荷蘭等國上市。我國衛生部在2003年食品添加劑使用衛生標準增補品種中首次將二十二碳六烯酸單細胞油（DHASCO）作為營養素強化劑添加到嬰幼兒食品中。國內每年DHA/AA嬰幼兒奶粉消耗量約為73萬噸,其中每100 g奶粉中約含有50 mg DHA和80 mg AA，因此，國內每年需求DHA約為912.5噸，AA約為1460噸。可見DHA/AA在國內具有巨大的市場潛力。
南京工業大學
2021-04-13