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中試階段/n該成果公開(kāi)了一種用于增強(qiáng)免疫力的石金錢龜提取物，它是將石金錢龜?shù)凝斎夂妄敿追謩e用水和乙醇進(jìn)行提取，龜肉提取液和龜甲提取液分別濃縮、干燥后，按0.5-3∶1的比例混合制成的。本發(fā)明還公開(kāi)了該提取物的制備方法和含有該提取物的制劑，以及該制劑的制備方法。所制得的石金錢龜提取物具有顯著的增強(qiáng)免疫力的作用，由該提取物制得的膠囊劑含藥量大，性質(zhì)穩(wěn)定，在正常室溫條件下可貯存兩年，不吸潮，不變質(zhì)，口感好，服藥順應(yīng)性佳，患者在服藥時(shí)和服藥后不會(huì)感覺(jué)到難受的腥味。

 納米表面結(jié)構(gòu)引導(dǎo)骨再生是當(dāng)前骨替代修復(fù)材料領(lǐng)域一個(gè)新的研究方向及研究熱點(diǎn)。目前的研究主要集中在納米表面結(jié)構(gòu)對(duì)成骨細(xì)胞系成骨分化的調(diào)控機(jī)制，而對(duì)成骨微環(huán)境中免疫細(xì)胞的調(diào)控作用研究甚少。本研究系統(tǒng)比較了巨噬細(xì)胞對(duì)不同納米顆粒大?。?6，38，68 nm）和不同表面化學(xué)成分（富含胺基的丙烯胺及富含羧基的丙烯酸）的納米表面結(jié)構(gòu)生物材料的免疫應(yīng)答差異，發(fā)現(xiàn)納米表面結(jié)構(gòu)可以改變巨噬細(xì)胞的形態(tài)，將胞外的理化信號(hào)轉(zhuǎn)入胞內(nèi)，激活自噬反應(yīng)，從而調(diào)控免疫微環(huán)境，影響間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。      該研究從骨形成免疫微環(huán)境的角度提出了“納米表面引導(dǎo)成骨”的新機(jī)制，提示通過(guò)精準(zhǔn)控制生物材料的納米表面結(jié)構(gòu)，可靶向調(diào)控免疫細(xì)胞，營(yíng)造有利于骨形成的免疫微環(huán)境，最終實(shí)現(xiàn)納米成骨，為納米骨生物材料的研發(fā)提供了新的策略。

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)TNF?α的光電免疫傳感器及其制備方法和應(yīng)用，光基底電極表面依次經(jīng)GO?PTC?NH2溶液、anti?TNF?α溶液修飾，所述基底電極為玻碳電極或氧化銦錫半導(dǎo)體電極。本發(fā)明利用GO?PTC?NH2納米復(fù)合物制備光電免疫生物傳感器用于腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的方法，與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附以及PCR等方法相比具有操作簡(jiǎn)便、技術(shù)要求低、反應(yīng)迅速的特點(diǎn)，所使用的光電探針摒棄了傳統(tǒng)金屬材料等的光腐蝕等弊端，穩(wěn)定性較好且負(fù)載量大，功能化基團(tuán)多，便于修飾。

研發(fā)階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價(jià)的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚(yú))、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測(cè)的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測(cè)HPLC方法進(jìn)行了對(duì)比。該方法的檢測(cè)限、回收率、變異系數(shù)均達(dá)到我國(guó)獸藥殘留快速檢測(cè)的要求。以上述方法為基礎(chǔ)，在國(guó)內(nèi)首次研制出動(dòng)物樣品中AOZ殘留檢測(cè)ELISA試劑盒。通過(guò)與國(guó)外同類試劑盒、HPLC法的比對(duì)和動(dòng)物殘留試驗(yàn)證明，該試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性與國(guó)外試劑盒水平相當(dāng)。經(jīng)多家檢測(cè)機(jī)構(gòu)和研究單位的復(fù)核和應(yīng)用表明，該試劑盒

該研究發(fā)現(xiàn)RNA病毒感染宿主細(xì)胞可誘導(dǎo)表達(dá)一種新型自噬受體CCDC50，該自噬受體通過(guò)識(shí)別K63型泛素化修飾的RNA病毒模式識(shí)別受體RIG-I/MDA5（RLR）并介導(dǎo)后者的自噬途徑依賴的降解，從而抑制病毒感染誘導(dǎo)的I型干擾素的產(chǎn)生，幫助機(jī)體恢復(fù)到靜息狀態(tài)，避免過(guò)度免疫反應(yīng)造成的組織損傷和自身炎癥。我校博士后侯盼盼為論文第一作者，郭德銀教授為通訊作者，我校醫(yī)學(xué)院、附屬第七醫(yī)院為第一作者單位。       天然免疫是一種非特異性的宿主抵抗病原微生物入侵的免疫反應(yīng),它廣泛存在于機(jī)體的絕大部分細(xì)胞，被認(rèn)為是機(jī)體抵抗病原體感染的第一道防線。隨著近幾十年的研究，人們對(duì)天然免疫系統(tǒng)愈發(fā)了解，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并鑒定出天然免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，然而某些重要調(diào)控因子的結(jié)構(gòu)和功能機(jī)制依然不清楚，且這些調(diào)控因子的生理和病理作用尚有待于研究。郭德銀教授課題組利用CRISPR/Cas9第二代文庫(kù)在免疫細(xì)胞中進(jìn)行了全基因組水平的大規(guī)模無(wú)偏差篩選，發(fā)現(xiàn)了一系列參與天然免疫反應(yīng)調(diào)控的新型基因。進(jìn)一步的驗(yàn)證過(guò)程中發(fā)現(xiàn)CCDC50蛋白在RNA病毒感染下表達(dá)量顯著增加且其表達(dá)模式和RLR的表達(dá)模式一致，提示著CCDC50可能參與調(diào)控RLR介導(dǎo)的信號(hào)通路活性。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該觀察結(jié)果，該課題組構(gòu)建了CCDC50條件缺失的小鼠模型，攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明缺失CCDC50后，病毒感染條件下，I型干擾素表達(dá)上調(diào)，其下游的ISGs表達(dá)水平也隨之升高，小鼠清除病毒能力增強(qiáng)，肺部組織損傷和炎性浸潤(rùn)減少，且小鼠存活率增加，從而證明CCDC50在機(jī)體水平具有生理學(xué)功能。       進(jìn)一步的機(jī)制探究中，該課題組發(fā)現(xiàn)CCDC50特異性識(shí)別K63泛素化修飾的RLR，并促進(jìn)激活的RLR的自噬途徑依賴的降解，此機(jī)制不同于以往了解較多的K48泛素化依賴的降解調(diào)控。該過(guò)程的發(fā)生并不依賴于常見(jiàn)的自噬受體p62， 因p62缺失后，CCDC50依然可以促進(jìn)RLR的降解，但CCDC50可與p62協(xié)同作用。劉迎芳教授團(tuán)隊(duì)解析了CCDC50分子LIR結(jié)構(gòu)域和LC3復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)分析證明CCDC50中存在一段非典型的LIR基序，該基序可以結(jié)合位于LC3的LDS結(jié)合位點(diǎn)，將K63泛素化修飾的RLR拉進(jìn)自噬小體。有趣的是，緊鄰LIR基序，CCDC50有一段MIU基序，該基序可稱為反向UIM基序，體外生化實(shí)驗(yàn)證實(shí)CCDC50-MIU可以結(jié)合在LC3的UDS位點(diǎn)，進(jìn)而證明CCDC50是一種新型自噬貨物受體，可以以兩段不同的疏水基序結(jié)合在LC3的不同位點(diǎn)。這類自噬貨物受體是首次在生物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)

納米囊泡的水腔包裹STING激活劑，表層通過(guò)MMP-2敏感的短肽PLGVRG偶聯(lián)抗PD-L1抗體。同時(shí)，通過(guò)酸敏感的酰胺鍵偶聯(lián)PEG，可阻礙抗PD-L1抗體與PD-L1陽(yáng)性的正常組織結(jié)合，從而賦予了納米藥物的隱身性能。

中試階段/n該項(xiàng)目公開(kāi)了一種能識(shí)別甲睪酮的特異性單克隆抗體,它是由保藏號(hào)為CCTCCNO:C201493的雜交瘤細(xì)胞株MT9C10所分泌的。本發(fā)明還公開(kāi)了一種檢測(cè)甲睪酮的酶聯(lián)免疫方法和試劑盒。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制備的單克隆抗體可以識(shí)別甲睪酮，識(shí)別靈敏度高，特異性好，本發(fā)明的ELISA方法和試劑盒檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好。

中試階段/n重組溶瘤 II 型單純皰疹病毒(OH2)注射劑屬于腫瘤免疫與腫瘤基因治療 I 類生物創(chuàng)新藥物，是繼腫瘤手術(shù)、放療和化療治療三大傳統(tǒng)手段后的第四大常規(guī)治療手段， 具有安全性高、靶向性好、殺傷效率高、副作用小和成本低等特點(diǎn)。根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，OH2 注射劑對(duì)結(jié)腸癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、頭頸部腫瘤等實(shí)體瘤具有良好的治療效果。同時(shí)， OH2可與聯(lián)合化療、放療、單抗類藥物聯(lián)合應(yīng)用。OH2 注射劑已完成主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)建立、OH2 三級(jí)種子批建立、初步穩(wěn)定性研究等臨床前研究和新藥審評(píng)相關(guān)工作，

排異反應(yīng)是異體組織進(jìn)入有免疫活性宿主的不可避免的難題。一般在人體器官移植手術(shù)后，病人的免疫系統(tǒng)會(huì)很快識(shí)別出外來(lái)的新器官，并對(duì)新器官有強(qiáng)烈的排斥作用，這種排異現(xiàn)象是導(dǎo)致器官移植手術(shù)徹底失敗的主要原因之一，嚴(yán)重時(shí)會(huì)使病人不喪失生命。為解決器官移植的排異問(wèn)題，出現(xiàn)了免疫抑制劑的概念。目前臨床常用的免疫抑制劑有環(huán)孢素 A（CsA）、他克莫司（tacrolimus, FK506）、雷帕霉素（Rapamycin，簡(jiǎn)稱 RAPA）等，但這幾種都有較大的副作用，所以尋求在臨床上高活性、低毒的新型免疫抑制劑很有必要。

中試階段/n該項(xiàng)目屬于檢測(cè)分析和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，與現(xiàn)有技術(shù)相比，該項(xiàng)目制備的單克隆抗體能夠特異性識(shí)別萊克多巴胺，酶聯(lián)免疫方法及試劑盒能檢測(cè)更低濃度的萊克多巴胺殘留，檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好。