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活載體疫苗是指對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌等微生物進(jìn)行基因改造，保留其基本入侵宿主細(xì)胞引起免疫反應(yīng)的能力，降低其對(duì)宿主造成危害毒力，之后通過(guò)外源插入疫苗靶點(diǎn)基因等方法建立起來(lái)的一種新型疫苗。近年來(lái)團(tuán)隊(duì)在對(duì)常見(jiàn)腸道致病菌致病機(jī)理研究的基礎(chǔ)上，篩選了單增李斯特菌做為載體菌，對(duì)其關(guān)鍵毒力基因進(jìn)行敲除構(gòu)建穩(wěn)定減毒突變株用來(lái)表達(dá)外源基因。目前團(tuán)隊(duì)已構(gòu)建了雙基因敲除株疫苗載體、半致死載體等活載體疫苗運(yùn)載系統(tǒng)，并對(duì)其進(jìn)行抗原遞呈、免疫機(jī)理等進(jìn)行了初步研究發(fā)現(xiàn)，該類疫苗載體對(duì)免疫因子具有強(qiáng)烈的激活效應(yīng)，更為重要的是該類活載體

胞內(nèi)寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過(guò)MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)，建立長(zhǎng)期有效的免疫保護(hù)記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項(xiàng)目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構(gòu)建通用平臺(tái)，該平臺(tái)具有以下優(yōu)勢(shì)：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達(dá)穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細(xì)菌基因組，永遠(yuǎn)不會(huì)丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號(hào)肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對(duì)環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會(huì)給環(huán)境和公共健康帶來(lái)危害。本平臺(tái)技術(shù)目前已獲得授權(quán)專利，成果屬于國(guó)際先進(jìn)水平，已在結(jié)核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應(yīng)用。該平臺(tái)還可應(yīng)用于腫瘤治療性疫苗及其他預(yù)防病毒和慢性細(xì)菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構(gòu)建平臺(tái)。

本產(chǎn)品為增強(qiáng)黏膜免疫的口服活載體疫苗，是新一代預(yù)防和治療乳仔豬腹瀉的特異 性免疫微生態(tài)制劑。主要成分為活菌乳酸重組菌，活菌總數(shù)≥3.5×109cfu/g，同時(shí)也 含有死菌以及代謝產(chǎn)物?；罹M(jìn)入機(jī)體后可定植在腸壁，通過(guò)生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生的乳酸和 乙酸，降低了腸道的PH及Eh值，改善內(nèi)部微環(huán)境，能抑制有害菌的生長(zhǎng)，其代謝產(chǎn)物對(duì) 機(jī)體有營(yíng)養(yǎng)作用，促進(jìn)免疫功能的作用。 該乳酸重組菌可促進(jìn)腸道有益菌落生長(zhǎng)繁殖，拮抗和抑制腸道內(nèi)有害菌增殖，糾正 腸道菌群紊亂，產(chǎn)生特異性抗體，預(yù)防和治療豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉等病毒引起 的腹瀉、下痢、細(xì)菌性腸炎等疾病，增強(qiáng)免疫力和抗病力。

本產(chǎn)品為增強(qiáng)黏膜免疫的口服活載體疫苗，是新一代預(yù)防和治療乳仔豬腹瀉的特異性免疫微生態(tài)制劑。主要成分為活菌乳酸重組菌，活菌總數(shù)≥3.5×109cfu/g，同時(shí)也含有死菌以及代謝產(chǎn)物?；罹M(jìn)入機(jī)體后可定植在腸壁，通過(guò)生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生的乳酸和乙酸，降低了腸道的PH及Eh值，改善內(nèi)部微環(huán)境，能抑制有害菌的生長(zhǎng)，其代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體有營(yíng)養(yǎng)作用，促進(jìn)免疫功能的作用。 該乳酸重組菌可促進(jìn)腸道有益菌落生長(zhǎng)繁殖，拮抗和抑制腸道內(nèi)有害菌增殖，糾正腸道菌群紊亂，產(chǎn)生特異性抗體，預(yù)防和治療豬傳染性胃腸炎、流行性腹瀉等病毒引起的腹瀉、下痢、細(xì)菌性腸炎等疾病，增強(qiáng)免疫力和抗病力。

研發(fā)階段/n該項(xiàng)目屬于動(dòng)物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒活載體疫苗。該疫苗株rDEV-HA5保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC?NO：V201404。本發(fā)明的構(gòu)建方法是：在鴨腸炎病毒人工染色體質(zhì)粒pBAC-C-KCE中插入了H5N1亞型禽流感病毒ha基因的片段得到重組質(zhì)粒pBAC-C-KCE-HA5。所述的質(zhì)粒pBAC-C-KCE的基因結(jié)構(gòu)組成如圖7所示；所述質(zhì)粒pBAC-C-KCE-HA5的基因結(jié)構(gòu)組成如圖14所示。生物學(xué)功能驗(yàn)證表明，本發(fā)明的疫苗有

目前，沙門菌的檢測(cè)主要還是采用傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)方法，通過(guò)前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)以及血清學(xué)鑒定的步驟一步一步進(jìn)行檢測(cè)，工作量大且耗時(shí)長(zhǎng)。PCR及Real Time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)雖然具有快速、簡(jiǎn)便等大量?jī)?yōu)點(diǎn)，卻較少應(yīng)用，主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術(shù)并不能區(qū)分細(xì)菌的死活細(xì)胞，樣品中存在的死細(xì)胞可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。本課題將EMA對(duì)死活細(xì)胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結(jié)合，有效克服了DNA分子檢測(cè)手段不能鑒別死活細(xì)胞的弊端，在實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的快速、簡(jiǎn)便的同時(shí)大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。確證了EMA-Real Time PCR可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中沙門菌活細(xì)胞的快速測(cè)定，可將EMA-Real Time PCR推廣到實(shí)際檢測(cè)工作中，如此便可大大縮短檢測(cè)所需的時(shí)間，節(jié)省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應(yīng)用前景。 社會(huì)效益：EMA-Real Time PCR可用于實(shí)際樣品中沙門菌活細(xì)胞的快速檢測(cè)，建立一種快速檢測(cè)病原菌的新方法體系，用于實(shí)際的檢測(cè)工作中，如此不僅可以減少食品安全日常監(jiān)測(cè)的工作量，更重要的是，在突發(fā)性食物中毒事件中，大大縮短了病原菌檢測(cè)所需時(shí)間，提高了反應(yīng)效率，為突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的解決提供更好的技術(shù)平臺(tái)。

??????? 非損傷微測(cè)技術(shù)（Non-invasive Micro-test Technology，NMT）源于美國(guó)MBL實(shí)驗(yàn)室（54位諾貝爾獎(jiǎng)得主的搖籃），由神經(jīng)學(xué)家Lionel F. Jaffe（美國(guó)揚(yáng)格公司創(chuàng)始人之一）于1974年發(fā)明，2001年，美國(guó)揚(yáng)格公司正式推出現(xiàn)代NMT。NMT是一種研究活體材料的底層核心技術(shù)，研究人員基于NMT能夠建立自己獨(dú)有的Me-Only 研究平臺(tái)，從而獲得極具創(chuàng)新的研究成果。 ??????? NMT可在不接觸、不損傷樣品的情況下，檢測(cè)分子/離子進(jìn)出生物活體的流速（流動(dòng)速率和方向），可測(cè)樣品種類繁多，小到菌、單細(xì)胞、液泡，大到組織、器官、整體都可檢測(cè)?；贜MT商業(yè)化的設(shè)備統(tǒng)稱為非損傷微測(cè)系統(tǒng)。 ??????? 揚(yáng)格/旭月的非損傷微測(cè)系統(tǒng)包含BIO系列、CONFLUX系列（共聚焦/熒光NMT）、NMT100系列、NMT200系列、NMT100S系列、NMT200S系列、NMT150系列、NMT活體工作站系列、NMT Physiolyzer?系列等，已發(fā)展至第七代自動(dòng)化智能產(chǎn)品。揚(yáng)格/旭月的NMT系統(tǒng)全部采用從美國(guó)揚(yáng)格（旭月北京）研發(fā)中心自主研發(fā)的imFluxes智能操作軟件，將十余年的NMT應(yīng)用大數(shù)據(jù)與設(shè)備實(shí)現(xiàn)完美結(jié)合，并且在產(chǎn)品一體化、自動(dòng)化、智能化、擴(kuò)展升級(jí)等諸多方面都有大幅提升。 ??????? 揚(yáng)格/旭月已取得基于NMT的數(shù)十項(xiàng)專利及軟件著作權(quán)，擁有完善的專利保護(hù)體系，所有產(chǎn)品全部通過(guò)中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證和ISO9001質(zhì)量體系認(rèn)證。揚(yáng)格/旭月所銷售的NMT專用耗材，已通過(guò)中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證，所有耗材是揚(yáng)格/旭月研發(fā)中心結(jié)合十余年的經(jīng)驗(yàn)、摸索并自主研發(fā)生產(chǎn)的。NMT專用耗材較傳統(tǒng)的通用型耗材保質(zhì)期更長(zhǎng)，性能更穩(wěn)定、可靠，所有對(duì)外銷售的耗材全部經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的生產(chǎn)、檢驗(yàn)流程。 ??????? 揚(yáng)格/旭月的NMT研究平臺(tái)已經(jīng)幫助國(guó)內(nèi)外科研單位取得近百項(xiàng)各類專利，以及包含Nature、Cell在內(nèi)的500多篇論文。同時(shí)，已銷往歐洲的瑞士蘇黎世大學(xué)（擁有包括愛(ài)因斯坦在內(nèi)10余位諾貝爾獎(jiǎng)得主），以及中國(guó)科學(xué)院、中國(guó)林科院、中國(guó)農(nóng)科院、農(nóng)業(yè)部下屬的眾多科研院所與高校，以及北大、上海交大等知名高校。 名稱：NMT活細(xì)胞工作站 代數(shù)：第七代 品牌：旭月 產(chǎn)地：中國(guó) 已獲得認(rèn)證：中關(guān)村NMT聯(lián)盟認(rèn)證，ISO9001國(guó)際質(zhì)量體系認(rèn)證 簡(jiǎn)介：NMT活細(xì)胞工作站是一款針對(duì)活細(xì)胞生理功能研究而特別設(shè)計(jì)的活體生理功能檢測(cè)平臺(tái)，可在細(xì)胞的正常培養(yǎng)/生長(zhǎng)環(huán)境中，檢測(cè)進(jìn)出細(xì)胞內(nèi)外的分子、離子的流速，反映細(xì)胞的實(shí)時(shí)生理狀態(tài)，分辨率高達(dá)10-12 mol級(jí)別。能滿足質(zhì)膜生理功能、神經(jīng)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等方向的臨床與基礎(chǔ)研究需求。 1 活體、原位、非損傷測(cè)量 對(duì)整體或分離后的樣品不造成損傷，獲取正常生理狀態(tài)下的信息。 2 無(wú)需標(biāo)記 預(yù)先知道測(cè)定的是何種指標(biāo)，無(wú)需用放射性、化學(xué)或藥理學(xué)等標(biāo)記方法，安全且環(huán)保。 3 不用提取樣品 可直接檢測(cè)，不需要研磨等傳統(tǒng)的提取方法。 4 實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)檢測(cè) 動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)（最短在6秒左右）檢測(cè)和獲取數(shù)據(jù)。 5 長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)檢測(cè) 可進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)8個(gè)小時(shí)以上的實(shí)時(shí)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。 6 可測(cè)指標(biāo) 采購(gòu)相對(duì)應(yīng)耗材后可單獨(dú)檢測(cè)Ca2+、Cl-濃度和流速。 預(yù)留指標(biāo)檢測(cè)升級(jí)端口，可升級(jí)指標(biāo)包含：IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、Ca2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+的濃度和流速檢測(cè)。 預(yù)留雙指標(biāo)檢測(cè)升級(jí)端口，升級(jí)后可單獨(dú)檢測(cè)一種離子或分子，也可同時(shí)檢測(cè)兩種離子或一種離子與一種分子的濃度和流速，用于離子/分子相關(guān)性研究及更前沿的科研探索。 7 可測(cè)樣品種類繁多 整體、器官、組織等都可以檢測(cè)（理論值：5μm-10cm均可）。 8 自動(dòng)化操作 X、Y、Z方向自動(dòng)/手動(dòng)操控傳感器移動(dòng)。 9 數(shù)據(jù)采集方式 X方向一維數(shù)據(jù)采集。 型號(hào) 功能 可升級(jí)功能 NMT-LCP 1.標(biāo)配兩種指標(biāo)：Ca2+、Cl-。 2.操作方式：三維自動(dòng)。 3.檢測(cè)樣品：可檢測(cè)樣品尺寸為5μm-10cm。 4.數(shù)據(jù)：1D。可直接檢測(cè)、輸出流速和濃度數(shù)據(jù)。 5.檢測(cè)方式：?jiǎn)蝹鞲衅鳈z測(cè) 6.異常報(bào)警：有 1.可升級(jí)指標(biāo)：膜電勢(shì)、IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+。 2.可擴(kuò)展：未來(lái)新研發(fā)指標(biāo)可擴(kuò)展升級(jí)。 3.可升級(jí)檢測(cè)方式：?jiǎn)?雙傳感器檢測(cè)可選。 4.數(shù)據(jù)：1D/3D可選。可直接檢測(cè)、輸出流速和濃度數(shù)據(jù)。 ? ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ? ??

于生物制藥生產(chǎn)廢水中通常含有病原性微生物，殺死病原體后才能排放到污水處理系統(tǒng)中，沃恩專門研制出一套生物滅活處理系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過(guò)持續(xù)穩(wěn)定的高溫使細(xì)菌的菌體變性或凝固酶失去活性而使細(xì)菌死亡，病菌在高溫下DNA、RN的化學(xué)吸收熱量導(dǎo)致鍵斷裂，從而滅活。本系統(tǒng)采用序批次處理方式，配有一個(gè)收集罐和兩個(gè)或兩個(gè)以上的滅活罐，通過(guò)間歇式方式運(yùn)行，確保使用過(guò)程中的節(jié)能環(huán)保，系統(tǒng)可靠性高；另外整個(gè)系統(tǒng)采用智能化控制，能夠?qū)崿F(xiàn)無(wú)人值守，全自動(dòng)運(yùn)行，并已在實(shí)際項(xiàng)目中取得顯著效果。

真核細(xì)胞具有復(fù)雜而高度有序的空間結(jié)構(gòu)，研究生物大分子的亞細(xì)胞定位，對(duì)于闡明其生物學(xué)功能有著重要意義。核酸分子在細(xì)胞中的特異性分布直接影響基因表達(dá)的效率，在蛋白質(zhì)翻譯調(diào)控、學(xué)習(xí)與記憶形成等一系列生物學(xué)過(guò)程中扮演了重要角色。針對(duì)亞細(xì)胞區(qū)域中RNA組份的研究，傳統(tǒng)手段依賴于化學(xué)交聯(lián)、免疫沉淀、離心分離等技術(shù)，不但需要預(yù)先破壞細(xì)胞的天然結(jié)構(gòu)，而且還局限于少數(shù)能夠被機(jī)械分離的亞細(xì)胞區(qū)域，缺乏普適性。 本研究提出“鄰近核酸標(biāo)記”的策略。該策略的核心是在活細(xì)胞中利用酶促反應(yīng)形成大量高活性的自由基，與酶鄰近的核酸分子發(fā)生共價(jià)加成反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)空間特異性標(biāo)記。從工程改造的過(guò)氧化物酶APEX2出發(fā)，鄒鵬課題組首先設(shè)計(jì)并合成了十余種與生物素偶聯(lián)的酶底物，并從中發(fā)現(xiàn)生物素-苯胺探針的核酸標(biāo)記活性最高。他們進(jìn)一步以線粒體、核纖層和核仁等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)為例，建立了在活細(xì)胞中開(kāi)展鄰近核酸標(biāo)記的方法，并通過(guò)定量PCR與高通量測(cè)序分析證實(shí)了標(biāo)記方法具有良好的空間特異性。鄰近核酸標(biāo)記技術(shù)操作簡(jiǎn)單、具有普適性，為日后研究核酸的亞細(xì)胞定位與功能關(guān)系提供了必要的工具。