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已有樣品/n迅裂細(xì)菌裂解酶與核酸提取試劑盒采用專利的噬菌體裂解酶，具有常溫 5-10 分鐘內(nèi)裂解、無(wú)毒無(wú)害等特點(diǎn)，并結(jié)合特有的技術(shù)能實(shí)現(xiàn)在取樣拭子上的原位裂解，大大簡(jiǎn)化從取樣拭子上獲得靶標(biāo)物如細(xì)菌等的核酸提取過(guò)程，具有提取效率高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是臨床PCR檢測(cè)，如產(chǎn)道中B簇鏈球菌和鼻拭子中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）,的 理想樣本前處理試劑。同時(shí)還研發(fā)了通用的真菌和細(xì)菌核酸提取試劑盒，與簡(jiǎn)單的渦旋儀聯(lián)用，可以裂解和提取任何真菌和細(xì)菌的核酸。市場(chǎng)前景:可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌裂解提取，應(yīng)用前景廣闊。

本發(fā)明提出了一種影響精子功能的唾液酸酶檢測(cè)方法。該方法是一種新的評(píng)估精子質(zhì)量與功能的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，可為臨床原因不明的男性不育患者提供檢測(cè)及臨床咨詢。首次報(bào)道精子唾液酸酶的表達(dá)與受孕能力的影響（7年原創(chuàng)研究歷史），國(guó)際與國(guó)內(nèi)領(lǐng)先地位。已新近申請(qǐng)4項(xiàng)中國(guó)相關(guān)專利和2項(xiàng)國(guó)際專利協(xié)定（ PCT）。

本項(xiàng)目來(lái)源于國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目成果，核心技術(shù)已獲得國(guó)家發(fā)明專利。復(fù)合酶皮膠原處理劑系列產(chǎn)品有A-G7個(gè)系列、12個(gè)品種，這些酶制劑可以分別用于以下不同的用途：（1）豬皮的臀部處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑A和復(fù)合酶皮膠原處理劑B）；（2）牛皮、山羊皮的頸紋處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑C）；（3）豬皮、山羊皮全皮脫毛處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑D），這種脫毛完全不同于文件1的有溫有浴酶脫毛，它是通過(guò)涂刷在皮的肉面進(jìn)行脫毛的；（4）水解動(dòng)物皮提取膠原（復(fù)合酶皮膠原處理劑E）；（5）豬皮、牛皮以及羊皮的浸酸軟化和藍(lán)坯革處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑F）；（6）豬、牛、羊皮的軟化處理（復(fù)合酶皮膠原處理劑G）。經(jīng)批量生產(chǎn)并應(yīng)用結(jié)果表明，本項(xiàng)目系列產(chǎn)品，綜合性能優(yōu)于或接近國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品，技術(shù)成熟。

由于基于酶抑制法的農(nóng)藥快速 檢驗(yàn)中所使用的動(dòng)物來(lái)源的酣酶普遍存在著提取成本高，活 性不穩(wěn)定， 不易于保存的間題。本團(tuán)隊(duì)從蕓豆中篩選并純化出一種植物酣酶。通過(guò)底

性能特點(diǎn)： 1、微機(jī)控制，觸摸面板，LCD顯示。 2、采用交流變頻電機(jī)。 3、可直接設(shè)定轉(zhuǎn)速，自動(dòng)計(jì)算RCF值。可直接設(shè)定RCF值，自動(dòng)轉(zhuǎn)換成轉(zhuǎn)速。 4、具有10檔升降速。 5、運(yùn)行中可修改參數(shù)，運(yùn)行參數(shù)自動(dòng)記憶。 6、具有10種自定義程序存儲(chǔ)功能。 7、具有軟剎車功能。 8、具有轉(zhuǎn)子號(hào)識(shí)別功能。 9、具有超速、不平衡和門蓋安全保護(hù)功能，并在顯示窗口顯示故障信息和聲音報(bào)警。

泛素-蛋白酶體體系（Ubiquitin-Proteasome System，簡(jiǎn)稱UPS）是細(xì)胞內(nèi)最重要的蛋白質(zhì)降解通路，對(duì)維持生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的濃度平衡，以及對(duì)調(diào)控蛋白、錯(cuò)誤折疊或受到損傷的蛋白的快速降解起著至關(guān)重要的作用，參與了細(xì)胞周期、基因表達(dá)調(diào)控等多種細(xì)胞進(jìn)程，由UPS失常引發(fā)的蛋白質(zhì)新陳代謝異常與眾多人類重大疾病直接相關(guān)。2004年，Aaron Ciechanover, Irwin Rose和Avram Hershko三位科學(xué)家被授予了諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，以表彰他們對(duì)該降解通路的發(fā)現(xiàn)。UPS中蛋白酶體是細(xì)胞中最基本的、最重要的不可或缺的、最為復(fù)雜的大型全酶超分子復(fù)合機(jī)器之一，人源蛋白酶體全酶包含至少33種不同的亞基，總原子質(zhì)量約為2.5MDa。美國(guó)FDA批準(zhǔn)的多種治療癌癥的藥物分子即以蛋白酶體為直接靶標(biāo)。近年來(lái)，隨著冷凍電鏡技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，人們對(duì)這一大分子機(jī)器的結(jié)構(gòu)和功能研究得以不斷深入。2016年，毛有東課題組與合作者報(bào)道了人源蛋白酶體基態(tài)的3.6?冷凍電鏡結(jié)構(gòu)及其他三個(gè)亞納米分辨構(gòu)象，并首次發(fā)現(xiàn)一個(gè)亞穩(wěn)態(tài)構(gòu)象的核心顆粒（Core Particle，簡(jiǎn)稱CP）底物轉(zhuǎn)運(yùn)通道處于開放狀態(tài)（見PNAS 2016, 113: 12991-12996）。2018年4月，該課題組又報(bào)道了6個(gè)ATPγS結(jié)合狀態(tài)下的26S動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，包括三個(gè)CP開放態(tài)對(duì)應(yīng)的亞穩(wěn)簡(jiǎn)并態(tài)近原子分辨（4~5?）結(jié)構(gòu)（見Nature Communications 2018, 9: 1360）。盡管這些工作揭示了蛋白酶體的基本架構(gòu)和內(nèi)在運(yùn)動(dòng)行為，但由于缺乏蛋白酶體與底物之間的相互作用，人們對(duì)于蛋白酶體如何實(shí)現(xiàn)底物降解的原子水平工作機(jī)制仍一無(wú)所知。此外，盡管冷凍電鏡技術(shù)近年來(lái)廣泛應(yīng)用于分析具有動(dòng)態(tài)特征的蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)和平衡態(tài)構(gòu)象，但對(duì)其中間態(tài)結(jié)構(gòu)和非平衡構(gòu)象分析的分辨率水平往往局限在4～6埃或更低，離真正的全原子水平動(dòng)力學(xué)分析還有相當(dāng)一段距離。 為了真正實(shí)現(xiàn)原子水平的蛋白酶體底物降解動(dòng)態(tài)過(guò)程的冷凍電鏡三維重建和動(dòng)力學(xué)表征，毛有東課題組攻克了兩大技術(shù)難題。其一，如何在蛋白酶體完成底物降解之前抓到它的所有可能的中間態(tài)構(gòu)象？課題組發(fā)展了一種新穎的核酸置換法，利用ATPγS降低AAA-ATPase激酶水解活性的特點(diǎn)，在底物降解中間過(guò)程，通過(guò)將ATP快速置換成ATPγS，結(jié)合快速冷凍的優(yōu)勢(shì)，從而撲捉到蛋白酶體在底物降解過(guò)程的中間態(tài)。其二，如何在從冷凍電鏡數(shù)據(jù)中分析出更多構(gòu)象的同時(shí)，還把分辨率做到3埃甚至更好？課題組通過(guò)多年持續(xù)努力，發(fā)展了多種基于人工智能和機(jī)器學(xué)習(xí)的冷凍電鏡圖像聚類的新型算法，并針對(duì)蛋白酶體的動(dòng)力學(xué)特征，設(shè)計(jì)了一套極其有效的整合了多種算法的多構(gòu)象分類流程。通過(guò)這兩套技術(shù)方案的完美結(jié)合，課題組成功解析了人源蛋白酶體在降解底物過(guò)程中的七種不同的、但差別甚微的、高分辨原子水平的天然態(tài)構(gòu)象（Native states），完整展示了蛋白酶體從泛素結(jié)合到去泛素化，再到底物轉(zhuǎn)運(yùn)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。與同期在Science上發(fā)表的與底物結(jié)合的酵母蛋白酶體的4.2-4.7埃冷凍電鏡結(jié)構(gòu)（Science doi: 10.1126/science.aav0725，來(lái)自加州伯克利分校和Scripps研究所）相比，該Nature論文不僅總構(gòu)象數(shù)量多一倍，全部構(gòu)象分辨率還高1-2埃。由于Science論文采用了抑制Rpn11去泛素活性的策略，其非天然態(tài)結(jié)構(gòu)中底物并不能真正自由轉(zhuǎn)運(yùn)，所推測(cè)的機(jī)理僅限于底物轉(zhuǎn)運(yùn)這一步，對(duì)于其他三大Nature論文所回答重要問(wèn)題均無(wú)法給出答案。這體現(xiàn)了該Nature論文不僅在實(shí)驗(yàn)方法的原創(chuàng)性上和數(shù)據(jù)分析水平和質(zhì)量上，更在科學(xué)發(fā)現(xiàn)和問(wèn)題探究的深度和廣度上大幅超越了來(lái)自Science的競(jìng)爭(zhēng)性論文。圖一 七個(gè)利用冷凍電鏡解析的精細(xì)原子結(jié)構(gòu)完整揭示了從泛素識(shí)別、去泛素化反應(yīng)、轉(zhuǎn)運(yùn)啟動(dòng)和持續(xù)降解的核心功能動(dòng)態(tài)過(guò)程。 作為整個(gè)蛋白酶體的動(dòng)力來(lái)源與運(yùn)轉(zhuǎn)核心，AAA-ATPase激酶分子馬達(dá)展現(xiàn)出了三種不同的核苷酸水解協(xié)作模式，6個(gè)ATPase亞基協(xié)調(diào)工作，交替與底物發(fā)生相互作用。在去泛素化過(guò)程（EB態(tài)）中，處于對(duì)立位置的兩個(gè)ATPase亞基Rpt2與Rpt4水解ATP，而Rpt5與Rpt6則釋放ADP，ATPase內(nèi)的底物轉(zhuǎn)運(yùn)通道被打開，使得底物可以進(jìn)入軸心通道；與此同時(shí)，去泛素化酶Rpn11亞基與泛素及底物發(fā)生相互作用，執(zhí)行其作為去泛素化酶的功能；在轉(zhuǎn)運(yùn)起始過(guò)程（EC態(tài)）中，相鄰的兩個(gè)ATPase亞基Rpt1與Rpt5會(huì)同時(shí)水解ATP，調(diào)控顆粒（Regulatory Particle，簡(jiǎn)稱RP）發(fā)生大規(guī)模轉(zhuǎn)動(dòng)并釋放泛素；在底物去折疊與轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程（ED態(tài)）中，三個(gè)相鄰的ATPase亞基會(huì)分別同步進(jìn)行ATP的結(jié)合、ADP的釋放與ATP的水解，這一過(guò)程會(huì)單向傳遞下去，將ATP水解釋放的化學(xué)能轉(zhuǎn)換為機(jī)械能，使得相應(yīng)的ATPase亞基發(fā)生剛體轉(zhuǎn)動(dòng)，推動(dòng)底物的去折疊和單向輸運(yùn)，同時(shí)CP的轉(zhuǎn)運(yùn)通道入口打開，底物被送入通道中進(jìn)行降解。這些研究結(jié)果為幾十年來(lái)對(duì)蛋白酶體功能的研究提供了寶貴的第一手原子結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)信息，對(duì)于理解生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的降解過(guò)程和一系列負(fù)責(zé)物質(zhì)輸運(yùn)的ATPase馬達(dá)分子的一般工作原理具有極為重要的科學(xué)意義。

本發(fā)明公開了一種抗蟲融合基因,該基因包括從5’-3’依次含有編碼BT晶體毒素Cry1的核苷酸序列和編碼Cry9Aa毒素的核苷酸序列;且上述2個(gè)核苷酸序列位于同一個(gè)開放閱讀框內(nèi)。該抗蟲融合基因包括Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Aa的修飾基因、Cry1Ab的修飾基因或Cry1Ac的修飾基因;還包括Cry9Aa或者Cry9Aa經(jīng)過(guò)修飾的基因。本發(fā)明還同時(shí)公開了上述抗蟲融合基因所編碼的融合蛋白,該融合蛋白從N端至C端依次為Cry1晶體毒素和Cry9Aa毒素。本發(fā)明的融合蛋白能用于制備轉(zhuǎn)基因抗蟲農(nóng)作物。

本發(fā)明公開了一種絲腺蠶絲蛋白的提取方法。將五齡熟蠶在水中浸死后，置于在一定溫度下放置，直至絲腺體凝固后解剖取出；將得到的中部絲腺蠶絲蛋白原料用蒸餾水清洗，除去蠶體組織雜質(zhì)，獲得中部絲腺蠶絲蛋白；將得到的后部絲腺蠶絲蛋白原料用蒸餾水清洗，得到的后部絲腺蠶絲蛋白為后部絲腺絲素；將中部絲腺蠶絲蛋白中的外層進(jìn)行剝離，外層剝離得到的蠶絲蛋白為中部絲腺絲膠，剝離剩余得到的內(nèi)部蠶絲蛋白為中部絲腺絲素。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單有效，避免了熟蠶直接解剖時(shí)絲腺蠶絲蛋白粘性而引起的操作不易性，具有勞動(dòng)強(qiáng)度低、提取效率高、產(chǎn)物易干燥和保存等特點(diǎn)；其成品可用于食品、化妝品、組織工程、載藥系統(tǒng)等多種領(lǐng)域，應(yīng)用范圍廣。

本發(fā)明涉及一種塑性絲膠蛋白膜的制備方法。目前還沒(méi)有一種工藝簡(jiǎn)單、制備條件溫和、無(wú)有毒化交聯(lián)劑、有較好的力學(xué)性能的塑性絲膠蛋白膜的制備方法。本發(fā)明的特點(diǎn)在于：依次包括如下步驟：（1）將蠶絲蛋白原料置于濃度為7-11mol/L的LiBr溶液中，于30-100℃的條件下溶解處理0.25-15min，得到不溶膠狀物；（2）將步驟（1）中得到的不溶膠狀物取出，用蒸餾水洗滌數(shù)次，除去不溶膠狀物中的LiBr分子，得到絲膠蛋白膠體；（3）將步驟（2）中得到的絲膠蛋白膠攤開鋪平，干燥后制得塑性絲膠蛋白膜。本發(fā)明的工藝簡(jiǎn)單、制備條件溫和、不添加任何化學(xué)交聯(lián)劑而獲得具有較好力學(xué)性能的塑性絲膠蛋白膜。