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【發(fā) 明 人】劉睿；段金廒；錢(qián)大瑋；唐于平；郭建明 【摘要】 本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗氧化活性的六肽、其分離方法及用途。本發(fā)明的多肽具有下列序列結(jié)構(gòu)：Gln-Tyr-Asp-Gln-Gly-Val。這種多肽提取分離自水牛角，藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明的多肽具有良好的抗氧化活性。

―疼痛‖是指病人身體內(nèi)部的傷害性感覺(jué)，它包括傷害性刺激作用于機(jī)體所引起的痛感覺(jué)，以及機(jī)體對(duì)傷害性刺激的痛反應(yīng)。長(zhǎng)期疼痛給患者帶來(lái)痛苦和不安，劇痛還可以引起失眠或其他生物功能紊亂，影響患者的生活質(zhì)量。因此，疼痛藥物的研發(fā)一直是全球性的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。目前臨床上使用的鎮(zhèn)痛藥物主要包括非甾體抗炎類(lèi)藥物（解熱鎮(zhèn)痛藥），阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥物和輔助鎮(zhèn)痛藥物。其中，阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥物主要通過(guò)與 μ 阿片受體結(jié)合發(fā)揮其鎮(zhèn)痛作用，不論是創(chuàng)傷痛、術(shù)后痛等急性痛，還是癌痛等慢性疼痛，阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥物都發(fā)揮著非常重要的作用，尤其在治療中度

研發(fā)階段/n內(nèi)容簡(jiǎn)介：本研究是以發(fā)酵、釀造、制糖、制藥等工廠的副產(chǎn)品米渣(濕渣蛋白含量35%)為主要原料，采用多菌種發(fā)酵的生物工程新技術(shù)，將米渣中的蛋白質(zhì)降解為可溶性游離的復(fù)合氨基酸和短肽營(yíng)養(yǎng)液。該營(yíng)養(yǎng)液配比合理，不含任何色素和防腐劑，是一種獨(dú)特的發(fā)酵型純天然保健飲品，色澤為淡黃色，清亮、透明，酸甜可口。該研究選用了多種正交試驗(yàn)法對(duì)單、雙、多菌種的種子和發(fā)酵配養(yǎng)基配方、工藝路線及參數(shù)等關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行優(yōu)選、對(duì)比，驗(yàn)證擴(kuò)大試驗(yàn)，掌握了該技術(shù)的關(guān)鍵。據(jù)查新檢索目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有相同工藝產(chǎn)品的文獻(xiàn)報(bào)道。中試成果

本發(fā)明公開(kāi)了一種丁酸梭菌分泌的抗菌肽及其氨基酸序列和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQ?ID?NO:1所示，分子量為2264.6道爾頓，等電點(diǎn)為8.64。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中丁酸梭菌分泌的的抗菌肽，利用陽(yáng)離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開(kāi)發(fā)制備飼用抗菌藥物。

本發(fā)明涉及一種黃粉蟲(chóng)肽的分離鑒定及功能分析方法，采用超聲處理、技術(shù)篩選、超濾分子截流、分子篩、反相高壓液相色譜(HPLC)柱層析、質(zhì)譜和氨基酸分析等技術(shù)，從誘導(dǎo)的黃粉蟲(chóng)中分離到氨基酸序列為SEQ?ID?NO : 1的八肽，并進(jìn)一步驗(yàn)證其抗氧化活性，證實(shí)其抗氧化功能強(qiáng)于谷胱甘肽，為該天然抗氧化八肽的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

本項(xiàng)目的特點(diǎn)是尿綜合利用聯(lián)產(chǎn)工藝，可將尿激酶、激肽釋放酶，抑肽酶和高純度尿多酸肽四種成分分別提取分離出來(lái)，能大大降低成本。高純度高分子尿激酶新工藝曾與中國(guó)藥品檢定所共同舉辦了學(xué)習(xí)班，轉(zhuǎn)讓給了四家藥廠還承擔(dān)制作了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和亞太地區(qū)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，MW54，000達(dá)100%，而英國(guó)制作的樣品只有60%。尿多酸肽是國(guó)際上唯一的尿制劑抗癌藥物，但含75%尿素、銨鹽、類(lèi)黑精、雜醇油等大量雜質(zhì)，副作用大，穩(wěn)定性差。本工藝排雜徹底，提取分離純化手段先進(jìn)，成本低，收率高，純度高，活性高，無(wú)副作用。

血管活性腸肽(vasoactiveintestinalpeptide，VIP)是一種由 28 個(gè)氨基酸組成的多肽，主要是由外周神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生，由副交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放，并且與乙酰膽堿共同存在，被認(rèn)為是胰高血糖素-胰泌素家族的一員。廣泛分布在中央神經(jīng)系統(tǒng)的類(lèi)膽堿突觸前神經(jīng)細(xì)胞和外周肽能神經(jīng)細(xì)胞中，通過(guò)它可對(duì)多種器官進(jìn)行神經(jīng)支配，比如心臟，肺，消化系統(tǒng)和泌尿生殖道，眼睛，皮膚，卵巢和甲狀腺。VIP 在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中是一種重要的信號(hào)肽，通過(guò)其受體發(fā)揮生理作用，迄今為止，已有 3 種類(lèi)型的 V

成果描述：本課題采用理性設(shè)計(jì)的策略，通過(guò)基因重組的手段構(gòu)建雜合抗菌肽LfcinB-P-CB，具有活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)對(duì)抗菌肽工程菌發(fā)酵優(yōu)化，及抗菌肽純化、制劑工藝研究，建立中試規(guī)模的抗菌肽制劑的制備體系。抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；實(shí)現(xiàn)雜合抗菌肽LfcinB-P-CB在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，解決抗生素等化學(xué)抗菌材料造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題，降低某些物質(zhì)會(huì)以原型或代謝物形式排泄造成環(huán)境污染使環(huán)境中出現(xiàn)耐菌株的可能性，從而給人類(lèi)生存環(huán)境構(gòu)成危害。市場(chǎng)前景分析：據(jù)國(guó)外報(bào)道，歐洲各國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)、養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)禽場(chǎng)無(wú)一例外普遍在配合飼料中添加了上述獸用抗生素作為“動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑”。泰洛星已成為當(dāng)今世界上頭號(hào)獸用抗菌劑，去年泰洛星的銷(xiāo)售額高達(dá)2.75億美元。我國(guó)當(dāng)前的動(dòng)物養(yǎng)殖面臨越來(lái)越嚴(yán)峻的疫病困擾，因此抗菌肽產(chǎn)品在動(dòng)物保健方面的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用在我國(guó)需求巨大。2010年全國(guó)動(dòng)物用抗菌肽類(lèi)產(chǎn)品年銷(xiāo)售額接近一億元，但抗菌肽的總市場(chǎng)容量至少超過(guò)100億。因此本項(xiàng)目開(kāi)發(fā)的抗菌肽具有廣闊的市場(chǎng)前景。與同類(lèi)成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；

本發(fā)明公開(kāi)了一種地衣芽孢桿菌分泌的抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQIDNO.1所示，分子量為1290.4道爾頓，等電點(diǎn)5.23。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中地衣芽孢桿菌分泌的的抗菌肽，利用陰離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開(kāi)發(fā)制備飼用抗菌藥物。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所謂的疼痛，是一種復(fù)雜的生理心理活動(dòng)，是臨床上最常見(jiàn)的癥狀之一。它包括傷害性刺激作用于機(jī)體所引起的痛感覺(jué)，以及機(jī)體對(duì)傷害性刺激的痛反應(yīng)。長(zhǎng)期疼痛給患者帶來(lái)痛苦和不安，劇痛還可以引起失眠或其他生物功能紊亂，影響患者的生活質(zhì)量。因此，疼痛藥物的研發(fā)一直是全球性的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。阿片類(lèi)藥物因其止痛作用強(qiáng)，在緩解重度疼痛具有無(wú)可取代的地位。然而它們?cè)谄鸬芥?zhèn)痛作用的同時(shí)往往伴隨很多副作用，很大程度上限制了其在鎮(zhèn)痛方面的應(yīng)用。臨床上鎮(zhèn)痛最常應(yīng)用的是阿片藥物，除了眾所周知的副作用外，不同的阿片藥物治療還可產(chǎn)生