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關(guān)于蛋白質(zhì)訂書機(jī)酶實(shí)現(xiàn)高效多肽-多肽偶聯(lián)反應(yīng)
高效的 多肽 - 多肽偶聯(lián)反應(yīng)對(duì)于 制備蛋白 - 藥物綴合物、調(diào)控蛋白質(zhì)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、生物成像 、化學(xué)生物學(xué) 等 領(lǐng)域 具有重要的意義 ，并因其可基因編碼的特性 而 備受關(guān)注 。目前， 研究 報(bào)道 此類連接方法 并不太多 見(jiàn) ，其中 分選酶（ sortase ） 或 蝶豆粘酶 -1 （ butelase 1 ） 介導(dǎo)的偶聯(lián)反應(yīng)具有較好的底物 序列特異性 ， 內(nèi)含肽 （ intein ） 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)連接方法 可實(shí)現(xiàn) 可基因編碼的高效主鏈連接， 而 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶 （ transglutaminase ） 則 可以 介導(dǎo) 非特異性的 側(cè)鏈異肽鍵 偶聯(lián) 。近年來(lái) ， 多肽 - 蛋白質(zhì)反應(yīng)對(duì) 的 蓬勃發(fā)展 為此類工具 的 發(fā)展 提供了新的契機(jī) 。 已 有 諜連接酶（ SpyLigase ）和探連接酶（ SnoopLigase ） 介導(dǎo) 的多肽 - 多肽偶聯(lián)體系 見(jiàn)諸報(bào)道 ，但其效率仍 有 待提高， 而 其 細(xì) 胞內(nèi)的應(yīng)用前景仍有待探索。 最近 ， 張文彬課題組發(fā)展了 獨(dú)特的具有無(wú)序結(jié)構(gòu)的 諜訂書機(jī) 酶 （ SpyStapler ），可實(shí)現(xiàn) 諜標(biāo)簽 （ SpyTag ）和北大 標(biāo)簽 （ BDTag ）在 細(xì) 胞內(nèi)和 細(xì) 胞外的高效偶聯(lián) （圖 1 ） 。
北京大學(xué)
2021-04-11
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自然界中首例 [6+4] 環(huán)加成反應(yīng)的酶
鑒定首個(gè)高階環(huán)加成酶，拓展了環(huán)加成酶的認(rèn)知
一、項(xiàng)目分類
重大科學(xué)前沿創(chuàng)新
二、成果簡(jiǎn)介
南京大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院梁勇教授，生命科學(xué)學(xué)院譚仁祥教授和戈惠明教授的科研團(tuán)隊(duì)，發(fā)現(xiàn)了抗幽門螺旋桿菌的潛在藥物-漢城霉素并對(duì)其生物合成途徑進(jìn)行深入研究。通過(guò)多菌株基因組序列比對(duì)，對(duì)漢城霉素類生物合成基因簇進(jìn)行了鑒定，利用微生物學(xué)，分子生物學(xué)、底物化學(xué)衍生化、體外酶促反應(yīng)等手段從該基因簇中鑒定出一個(gè)新穎、可催化高階環(huán)加成反應(yīng)的酶。團(tuán)隊(duì)基于蛋白質(zhì)晶體數(shù)據(jù)，量子化學(xué)計(jì)算和蛋白質(zhì)定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)該酶促動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行了深入解析，最終確定該酶通過(guò)“雙過(guò)渡態(tài)”來(lái)同時(shí)催化產(chǎn)生6+4和4+2環(huán)加成產(chǎn)物。該特殊高階環(huán)加成酶的發(fā)現(xiàn)，解答了“自然界中是否存在酶催化的高階環(huán)加成反應(yīng)”，這一持續(xù)五十余年的謎題。這類酶的發(fā)現(xiàn)將進(jìn)一步拓展人們對(duì)周環(huán)反應(yīng)酶的認(rèn)識(shí)，啟發(fā)科學(xué)家們將來(lái)利用和改造周環(huán)反應(yīng)酶來(lái)實(shí)現(xiàn)有價(jià)值的分子轉(zhuǎn)化。
成果于2019年4月以Letter形式發(fā)表于Nature。F1000評(píng)述該研究“鑒定首個(gè)高階環(huán)加成酶，拓展了環(huán)加成酶的認(rèn)知”，諾貝獎(jiǎng)得主霍夫曼評(píng)述“這是在酶促反應(yīng)中直接觀察到的[6+4]環(huán)加成產(chǎn)物的首個(gè)例子……，該研究對(duì)酶促高階環(huán)加成研究具有深遠(yuǎn)影響”。
南京大學(xué)
2022-08-12
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重組大腸桿菌生產(chǎn)磷脂酶D及轉(zhuǎn)酯化產(chǎn)品開(kāi)發(fā)
磷脂酶D（PLD,EC 3.1.4.4）是一類廣泛存在于各種生物體的酶，具有水解作用和磷酰基轉(zhuǎn)移作用（見(jiàn)圖1）。作為一種酶制劑，PLD的轉(zhuǎn)磷脂酰活性尤為重要，被用于制備具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰膽堿（PC）為底物，PLD酶法制備磷脂酰絲氨酸（PS），受到廣泛關(guān)注。PS作為腦健康營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，相繼被美國(guó)FDA、日本HBM和中國(guó)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委所認(rèn)證，列為新資源食品。相較于提取自牛腦和植物的PS，生物酶法制備的PS，避免了食品安全和植物源含量低的問(wèn)題。進(jìn)一步，一些新的結(jié)構(gòu)和功能磷脂，通過(guò)PLD轉(zhuǎn)磷脂酰反應(yīng)被合成出來(lái)，例如，磷脂酰鯊肝醇、磷脂酰葡萄糖、心磷脂類似物、磷脂酰酪醇、磷脂酰萜烯和磷脂酰絲氨醇，它們中一些具有抗癌和抗氧化活性。
直到現(xiàn)在，受限于磷脂酶D來(lái)源不足和價(jià)格高（鏈霉菌屬PLD，≥150 units/mg，6516.9¥/1000 U，Sigma公司），其工業(yè)上的廣泛應(yīng)用受到限制。例如，文獻(xiàn)報(bào)道的PLD最高產(chǎn)量在104-105U·L-1，而制備轉(zhuǎn)化得到每公斤PS，需要2.6×106U的PLD。這一障礙的主要原因是高水平表達(dá)的PLD對(duì)宿主的嚴(yán)重細(xì)胞毒性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
歷經(jīng)5年時(shí)間，從上游到下游整體設(shè)計(jì)，我們解決了毒性蛋白（磷脂酶D，PLD）異源表達(dá)難的問(wèn)題（質(zhì)粒不穩(wěn)定、蛋白合成時(shí)間短、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和裂解），PLD生產(chǎn)達(dá)到目前世界最高水平106U·L-1(748 mg·L-1)（提高20倍）；同時(shí)發(fā)展一種簡(jiǎn)單有效提取重組磷脂酶D的方法（無(wú)需破碎、無(wú)需添加溶菌酶和有機(jī)溶劑、室溫進(jìn)行），PLD生產(chǎn)成本有望降低20倍以上。按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的一臺(tái)5 L發(fā)酵罐，年產(chǎn)量可以提供3.5×108U的磷脂酶D，滿足100 kg的PS轉(zhuǎn)化需求計(jì)算（不計(jì)算PLD重復(fù)利用率），擴(kuò)大反應(yīng)器體積至100-1000 L，PLD產(chǎn)量可滿足制備2-20噸PS的需求。
廈門大學(xué)
2021-01-12
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一種巴斯德畢赤酵母、產(chǎn)生的耐高溫酶及應(yīng)用
本發(fā)明提供一種巴斯德畢赤酵母、產(chǎn)生的耐高溫蛋白酶及應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域；本發(fā)明通過(guò)選育一種可產(chǎn)生耐高溫酶的巴斯德畢赤酵母(pichia pastoris)AN?PK?9K?GS115，然后將其進(jìn)行培養(yǎng)，從發(fā)酵液中提取耐高溫蛋白酶，將其用于羽毛粉的水解，可以有效水解羽毛粉，將其中蛋白質(zhì)組分高效降解為小肽成分或者氨基酸成分，從而提高蛋白質(zhì)的消化率，增加采食量，提高動(dòng)物健康水平。
（注：本項(xiàng)目發(fā)布于2019年）
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
2021-01-12
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固定化磷脂酶A1在制備磷脂DHA中的應(yīng)用
本發(fā)明提供了一種固定化磷脂酶A1在制備磷脂DHA中的應(yīng)用，具體過(guò)程為，六水硝酸鈷和2?甲基咪唑分別溶于無(wú)水甲醇得到六水硝酸鈷溶液和2?甲基咪唑溶液，將2?甲基咪唑溶液滴加至六水硝酸鈷溶液中，攪拌反應(yīng)、靜置、干燥，得到ZIF?67納米材料，將ZIF?67納米材料于磷酸鈉緩沖液中混懸，加入磷脂酶A1溶液，調(diào)節(jié)pH，置于搖床孵育，離心、干燥，獲得ZIF?67納米材料固定化磷脂酶A1；將游離脂肪酸和大豆卵磷脂組成的底物和固定化磷脂酶A1在有機(jī)反應(yīng)體系中進(jìn)行催化反應(yīng)，分離純化獲得磷脂DHA。固定化磷脂酶A1，穩(wěn)定性好，催化制備磷脂DHA，DHA摻入率高達(dá)51.04%。
南京工業(yè)大學(xué)
2021-01-12
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基于固定化酶生產(chǎn)低分子量肝素的新工藝
低分子量肝素(LMWH)是臨床上最主要的天然抗凝劑，目前主要是通過(guò)動(dòng)物來(lái)源的肝素進(jìn)行酶降解制得。歐洲藥典要求 LMWH 的分子量為 6000~8000，質(zhì)量控制是生產(chǎn) LMWH 的重要環(huán)節(jié)。而肝素酶的活性和利用率直接影響 LMWH 生產(chǎn)成本和產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)。
本項(xiàng)目組利用融合肝素酶 I (Hep I)與甲殼素之間的親和作用，實(shí)現(xiàn)酶的循環(huán)利用，同時(shí)融合酶活性和穩(wěn)定性提高。利用綠色溶劑體系制備形態(tài)完好、尺寸均一的甲殼素微球。用固定化酶制備的 LMWH 產(chǎn)品達(dá)到歐洲藥典要求，實(shí)現(xiàn)了分子量可控，生產(chǎn)過(guò)程可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。該項(xiàng)目將對(duì) LMWH 產(chǎn)業(yè)的綠色和經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)提供技術(shù)支持。目前已發(fā)表 SCI 論文 2 篇，并與相關(guān)企業(yè)開(kāi)展了合作。
江南大學(xué)
2021-04-13
高性能角蛋白酶的高效表達(dá)與應(yīng)用研究
角蛋白酶是一種特異性蛋白酶類，可降解結(jié)構(gòu)復(fù)雜、硬質(zhì)難溶的角蛋白，具有多種優(yōu)良的催化特性，在生物加工、綠色制藥、廢棄生物質(zhì)處理、生物制革、生態(tài)紡織、洗滌劑等實(shí)際應(yīng)用中備受關(guān)注，被認(rèn)為是有著巨大應(yīng)用潛力和市場(chǎng)前景的新一代蛋白酶類。
本項(xiàng)目從角蛋白酶基因挖掘、高效表達(dá)、性能改造及其應(yīng)用研究等方面開(kāi)展了一系列工作。課題組目前建立了角蛋白酶資源庫(kù)，是我國(guó)擁有角蛋白酶基因資源產(chǎn)權(quán)最多和最具多樣性來(lái)源的單位；實(shí)現(xiàn)了角蛋白酶基因在大腸桿菌及枯草芽孢桿菌等外源宿主中的克隆及高效表達(dá)；在 5L 罐上發(fā)酵酶活最高可達(dá)10000 U/mL 以上，是目前文獻(xiàn)報(bào)道的重組角蛋白酶表達(dá)最高水平；項(xiàng)目已完成了 1M3 規(guī)模中試試驗(yàn)，成本降低 30%以上。在應(yīng)用方面，本項(xiàng)目成功將角蛋白酶用于生物法制備納米銀粒子 AgNPs，與傳統(tǒng)化學(xué)法相比，酶法合成的納米銀具有更好的抑菌活性。另外，項(xiàng)目組已首次開(kāi)發(fā)出無(wú)膠原活力的高特異性角蛋白酶，具有高角蛋白活力，不會(huì)對(duì)皮革膠原造成破壞，能保護(hù)膠原結(jié)構(gòu)完整性，可開(kāi)發(fā)出不傷及皮膚真皮的洗滌劑產(chǎn)品、藥品及化妝品，在生物制革領(lǐng)域也具有極大應(yīng)用價(jià)值，可緩解制革工業(yè)中的爛皮現(xiàn)象；同時(shí)本研究所開(kāi)發(fā)的角蛋白酶在活性多肽制備中也表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。
江南大學(xué)
2021-04-13
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白云石生產(chǎn)輕質(zhì)碳酸鎂,輕質(zhì)氧化鎂, 阻燃劑 用氫氧化鎂
輕質(zhì)碳酸鎂，輕質(zhì)氧化鎂，阻燃劑型氫氧化鎂等鎂鹽系列產(chǎn)品是重要的無(wú)機(jī)鹽產(chǎn)品，不僅用途廣泛，而且用量很大，是當(dāng)前備受重視的商業(yè)產(chǎn)品之一。過(guò)去生產(chǎn)這些產(chǎn)品一般是以制鹽業(yè)后的苦鹵水及純堿或碳銨為原料生產(chǎn)，由于原材料價(jià)格較高，生產(chǎn)能力受到成本的限制，為滿足市場(chǎng)的需要，一些科研人員和生產(chǎn)商家們開(kāi)始研究以白云石為原料來(lái)生產(chǎn)這些產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)幾年的努力攻關(guān)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)成立了多級(jí)碳化法，由白云石來(lái)制備輕質(zhì)碳酸鎂等鎂系列產(chǎn)品。產(chǎn)品主要用于橡膠，陶瓷，耐火材料，耐火坩堝，油漆，造紙，醫(yī)藥，玻璃，染料，塑料，日用化妝品，無(wú)機(jī)新型阻燃劑氫氧化鎂大量用于橡膠，塑料生產(chǎn)中，它們還用于現(xiàn)代工業(yè)中作為高效排煙脫硫劑廣泛使用，作為阻燃劑使用，氫氧化鎂具有降低，抑煙阻燃等多種功能，而受到用戶的歡迎。上述產(chǎn)品由于原料來(lái)源方便，價(jià)格低廉，生產(chǎn)中無(wú)或低“三廢”排放，產(chǎn)品用途廣泛，用量大，應(yīng)用功效高等特點(diǎn)，因而具有十分美好的應(yīng)用前景。
武漢工程大學(xué)
2021-04-11
科學(xué)技術(shù)大學(xué).jpg){kind=logo}
二氧化釩基單晶體的制備方法及二氧化釩基單晶體
絕緣體-金屬相變材料領(lǐng)域。 利用簡(jiǎn)單易行的方法制備大尺寸高質(zhì)量二氧化釩單晶體，實(shí)現(xiàn)了二氧化釩單晶體電阻的快速溫度響應(yīng)。
中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
2021-04-14
一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器，一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器
產(chǎn)品詳細(xì)介紹一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器濟(jì)南中誠(chéng)專業(yè)生產(chǎn)廠家，【TEL：0531-88883789 聯(lián)系人：李經(jīng)理】，一氧化碳進(jìn)入人體之后
會(huì)和血液中的血紅蛋白結(jié)合，進(jìn)而使血紅蛋白不能與氧氣結(jié)合，從而引起機(jī)體組織出現(xiàn)缺氧，導(dǎo)致
人體窒息死亡，因此一氧化碳具有毒性，一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器RBK-6000型產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于煉焦、煉鐵、鍛冶、鑄造和
熱處理的生產(chǎn)等工業(yè)等存在一氧化碳?xì)怏w的危險(xiǎn)場(chǎng)所。固定式是由兩部組成的,一部分是RBK-6000
型氣體報(bào)警控制器,一部分是RBT-6000的一氧化碳濃度報(bào)警器,探測(cè)器與控制器之間采用三芯屏蔽電
纜或ZRRVV三芯電纜連接，探測(cè)器和控制器上都有接線端子。一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器RBK-6000型控制器高端的人性化設(shè)計(jì)
，主機(jī)采用了壁掛式箱體設(shè)計(jì)，面板狀態(tài)直接顯示，安裝簡(jiǎn)單，操作方便。一氧化碳泄漏檢測(cè)儀探
測(cè)器采用工業(yè)專用防爆裝置，進(jìn)口氣敏傳感器檢測(cè)靈敏度使用壽命長(zhǎng)。
濟(jì)南中誠(chéng)儀器儀表有限公司生產(chǎn)的液化氣泄露檢測(cè)儀液化氣氣體報(bào)警器證書齊全,有公安部及
消防部頒發(fā)的型式認(rèn)可證書,防爆合格證,ISO-9000認(rèn)證等,一氧化碳濃度超標(biāo)檢測(cè)儀銷往全國(guó)各地
，十年的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)和高端的科研隊(duì)伍是各行各業(yè)廠家值得信賴的產(chǎn)品，愿廣大消費(fèi)者前來(lái)采購(gòu)。
一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器產(chǎn)品特點(diǎn)：
RBK-6000使用高速CPU處理器，能夠快速精確地處理系統(tǒng)任務(wù)，保證系統(tǒng)的可靠性。
LCD液晶屏幕，可實(shí)時(shí)顯示探測(cè)器的濃度、狀態(tài)。
使用485通訊協(xié)議，可靠性高。
4組可編程的繼電器，無(wú)源常開(kāi)、常閉觸點(diǎn)，觸點(diǎn)容量240V5A
采用模塊化結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，便于系統(tǒng)維護(hù)。
可通過(guò)計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)本地監(jiān)控及遠(yuǎn)程監(jiān)控，探測(cè)器運(yùn)行狀態(tài)數(shù)據(jù)可永久存儲(chǔ)。
實(shí)現(xiàn)可燃與毒性氣體探測(cè)器的混合配置。
選購(gòu)配件
備電電源轉(zhuǎn)化模塊。
中繼器模塊
聯(lián)動(dòng)控制模塊
執(zhí)行器
一氧化碳?xì)怏w報(bào)警器技術(shù)參數(shù)：
與RBT-6000氣體探測(cè)器配套使用
工作電壓：AC220V±10%
使用溫度：-20℃～60℃
使用濕度：≤95%RH
LCD液晶屏幕顯示：ppm/%LEL
報(bào)警系統(tǒng)：聲光報(bào)警
報(bào)警音量：≥75dB
傳輸距離：≤2000m
外形尺寸：370mm(L)×305mm(W)×90mm(H)
重量：≤4.5kg
濟(jì)南中誠(chéng)儀器儀表有限公司
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濟(jì)南中誠(chéng)儀器儀表有限公司
2021-08-23