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2020年2月25日，天津大學生命科學學院黃金海教授團隊成功研發(fā)出新型冠狀病毒口服疫苗，該疫苗以食品級安全釀酒酵母為載體，以新型冠狀病毒S蛋白為靶點產(chǎn)生抗體。黃金海教授本人已經(jīng)4倍量口服新冠疫苗樣品，無任何副反應(yīng)。目前科研團隊正在尋求合作方，希望能推動疫苗早日走向臨床，為疫情防控發(fā)揮作用。新型冠狀病毒S蛋白（Spike protein，刺突蛋白）可與宿主細胞的病毒受體結(jié)合，是決定病毒入侵易感細胞的關(guān)鍵蛋白，也是開發(fā)預防或治療用新型冠狀病毒疫苗與藥物的關(guān)鍵靶點。疫情爆發(fā)后，黃金海團隊日夜奮戰(zhàn)迅速設(shè)計制定了穩(wěn)定表達COVID-19病毒S蛋白保護性抗原RBD-FP域疫苗菌株的研發(fā)方案。該疫苗，應(yīng)用食品級安全酵母作為宿主研制生物防治制劑，通過口服途徑免疫，具有激發(fā)局部黏膜免疫、調(diào)節(jié)機體免疫穩(wěn)態(tài)，使用方便，安全性好、產(chǎn)能迅速等優(yōu)勢。目前，團隊已完成了重組菌株構(gòu)建、篩選，蛋白表達、發(fā)酵動力學等核心技術(shù)開發(fā)內(nèi)容，并制備了少量膠囊、奶片、顆粒劑口服防治制劑樣品。據(jù)黃教授介紹，該疫苗，除表達的病毒外源基因外，表達元件全部為釀酒酵母自身基因片段，不含外源抗性基因。新型冠狀病毒疫苗制劑通過高表達新冠病毒保護性抗原，一方面可作為病毒感染的競爭性治療制劑，也可通過激活黏膜免疫的疫苗機制，發(fā)揮預防性抗感染功能。其安全性、免疫方式、成本節(jié)約等優(yōu)勢突出，特別適用于應(yīng)急性、無常規(guī)疫苗的烈性病防控。

新型冠狀病毒疫情爆發(fā)之后，該校生命科學學院迅速成立了由青年教師陳蕾博士牽頭的科研攻關(guān)小組。近日，在山東省科技廳“新型冠狀病毒感染的肺炎疫情應(yīng)急技術(shù)攻關(guān)及集成應(yīng)用”重大科技創(chuàng)新工程的支持下，課題組聯(lián)合濰坊安普未來生物科技有限公司、山東省大健康精準醫(yī)療產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，共同研發(fā)出新型冠狀病毒核酸快速檢測試劑盒。目前市面上的核酸檢測仍是傳統(tǒng)的熒光定量PCR方法，需要采取反轉(zhuǎn)錄、熒光定量擴增等多重操作，總體時間需要2小時左右，操作復雜，檢測人員感染風險高。該試劑盒采用恒溫擴增技術(shù)，在保證靈敏度和特異性的基礎(chǔ)上，只需“一次開蓋一步操作”，簡化了操作步驟，縮短了擴增檢測時間，整個檢測過程只需要不到20分鐘。“操作熟練的檢測人員可以在5到10分鐘內(nèi)完成檢測。”生命科學學院院長楊桂文表示。由于減少了操作時間，從而大大降低了檢測人員的感染風險，增加了操作安全性。目前該試劑盒已經(jīng)進入國家食品藥品監(jiān)督管理局審報程序。

新冠病毒除了呼吸道傳播以外，是否還有其他途徑，這一直是科研人員關(guān)心的熱點問題。2月26日，浙江大學醫(yī)學院附屬第一院副院長、眼科學科帶頭人沈曄教授團隊，在《醫(yī)學病毒學雜志》(Journal of Medical Virology)在線發(fā)表了一項研究工作，揭示在研究的新冠肺炎患者樣本中，存在一名結(jié)膜炎患者的眼淚和結(jié)膜分泌物樣本，在核酸檢測中出現(xiàn)病毒陽性結(jié)果。該研究第一作者為夏建華，共同通訊作者為沈曄、郭東煜。論文第一單位為浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院。沈曄介紹，研究不同的傳播方式，對于把握新冠病毒傳染規(guī)律，改進疾病治療方法和防控措施具有重要意義。浙大科研人員從1月26日至2月9日在浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院確診的30例新冠肺炎患者，對他們的淚液和結(jié)膜分泌物混合物開展研究。在第一階段6例樣本研究中，均未發(fā)現(xiàn)核酸檢測病毒陽性。團隊果斷認為，已有樣本并不具有代表性與全面性，為此需要延長觀察周期，繼續(xù)留在隔離病房開展采樣與研究。研究團隊在一位新冠肺炎患者身上發(fā)現(xiàn)，該病人左眼具有結(jié)膜炎癥，即新冠引起的紅眼病，而右眼沒有此癥狀。而在此前的了解中，該患者入院前無結(jié)膜炎。本次研究中的其他患者樣品核酸檢測均為陰性。研究樣本這位患者眼部的差異性非常具有代表性，在征得同意后，我們就研究結(jié)膜炎癥是否與病毒具有聯(lián)系。”通過核酸檢測，浙大研究人員發(fā)現(xiàn)患有結(jié)膜炎的左眼新冠病毒檢測為陽性，而右眼則是陰性。為確保研究準確性，對兩只眼睛的結(jié)膜分泌物做了三次核酸檢查，結(jié)果均一致。目前該患者通過抗病毒綜合治療，整體治愈的情況下，結(jié)膜炎癥也轉(zhuǎn)好，再次檢測眼部病毒轉(zhuǎn)陰。對于患者是如何因新冠病毒發(fā)生眼部結(jié)膜炎癥的，科研人員表示仍在持續(xù)研究。

復旦大學生物醫(yī)學研究院藍斐課題組、復旦大學附屬上海市公共衛(wèi)生臨床中心新冠研究團隊與上海艾躍生物單抗部門組成的新冠病毒聯(lián)合應(yīng)急攻關(guān)團隊傳來好消息。該團隊從新型冠狀病毒肺炎康復患者來源的樣本中，分離單B細胞并PCR克隆抗體可變區(qū)，快速獲取且篩選了上百株全人源抗體，發(fā)現(xiàn)其中多株可識別新冠病毒（WHO最新命名為“SARS-CoV-2”）RBD抗原。這項研究為開發(fā)全人源中和性抗體藥（Human NeutralizationAntibody）提供了有效的快速研發(fā)方案以及候選抗體。上述成果的最大特點在于，這些抗體是來自康復病人體內(nèi)天然產(chǎn)生的全人源新冠病毒抗體。據(jù)悉，組成應(yīng)急攻關(guān)團隊的三方將進一步通過“產(chǎn)學研一體化”的方式緊密合作，繼續(xù)從近期康復者來源的樣本中篩選出更多病毒特異性抗體，完成中和性試驗，以期獲得可阻止病毒侵染人體細胞的全人源中和性抗體。應(yīng)急攻關(guān)團隊積極響應(yīng)科技部號召，把研究成果第一時間公布出來應(yīng)用到戰(zhàn)勝疫情中，詳細數(shù)據(jù)和結(jié)果將會在近期發(fā)布。

近日，上海大學的趙春華教授團隊在中國科學院科技論文預發(fā)布平臺ChinaXiv發(fā)表重要工作，在7名新冠肺炎患者中進行臨床實驗，發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞移植療法能迅速、顯著改善重癥及危重癥患者的預后，有效規(guī)避細胞因子風暴，且無明顯副作用，為新冠肺炎患者的臨床治療提出新思路。目前認為，由于ACE2受體在肺泡2型細胞、血管內(nèi)皮細胞等高度、廣泛表達，因此新冠病毒一旦入侵人體即迅速擴散，并容易過度刺激免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生IL-2、IL-6、GSCF、IP10、MCP1等分子，進而觸發(fā)細胞因子風暴甚至導致死亡。最近發(fā)表在柳葉刀上的研究也顯示，重癥監(jiān)護室中的新冠肺炎重癥患者血漿細胞因子水平顯著升高，提示細胞因子風暴在新冠病毒致死過程中扮演的重要角色。針對這種情況，臨床采用激素治療抑制細胞因子的產(chǎn)生；采用非載體抗炎藥和大劑量維生素C降低炎癥反應(yīng)的程度；或直接采用IL-6等細胞因子的單克隆抗體，減弱免疫系統(tǒng)的攻擊性。但是這些手段主要針對免疫反應(yīng)的下游，作用較為片面，免疫調(diào)節(jié)作用不強。因此，研究者將目光轉(zhuǎn)向間充質(zhì)干細胞（MSCs）移植：這是一項成熟可靠的技術(shù)，已在移植排異和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫介導的炎癥疾病治療中得到廣泛應(yīng)用。間充質(zhì)干細胞存在于骨髓、器官間質(zhì)等結(jié)締組織中，具有極強的分化能力；可通過干擾抗原提呈細胞的激活和成熟、抑制 T 淋巴細胞的增殖、誘導活化T細胞凋亡和影響樹突狀細胞的風化，進而起到免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制作用。在2020年1月23日至2月16日期間，研究者共征集了首都醫(yī)科大學附屬北京安佑醫(yī)院的7名COVID-19患者，其中包括1名危重癥患者、4名重癥患者和2名輕癥患者，探究間充質(zhì)干細胞移植后14天內(nèi)，患者的免疫系統(tǒng)和炎癥系統(tǒng)功能變化，以及副作用的發(fā)生情況。新冠肺炎患者移植時間軸1. 無顯著不良反應(yīng)間充質(zhì)干細胞移植前，患者存在高燒（38.5°C±0.5°C）、虛弱、呼吸急促和低氧飽和度的癥狀；移植后2?4天，所有患者的所有癥狀均消失，安靜時血氧飽和度上升至95％以上。此外，移植后兩小時內(nèi)未觀察到急性過敏反應(yīng)，此后也未出現(xiàn)遲發(fā)性超敏反應(yīng)或繼發(fā)感染，初步證明該療法的安全性。2. 迅速顯著改善患者臨床癥狀和生化指標研究中1例危重癥患者存在高血壓史，一度達到3級高血壓，1月31日接受間充質(zhì)干細胞移植，療效尤其顯著。其直接效應(yīng)表現(xiàn)在：移植后2周內(nèi)，血漿淋巴細胞水平明顯下降，血漿C反應(yīng)蛋白水平從105.5 g/L（2月1日達峰191.0 g/L）降低10倍左右，恢復到10.1 g/L，表明炎癥反應(yīng)迅速緩解；在不額外吸氧的情況下，血氧飽和度從89%升高至98%，表明肺泡換氣功能基本恢復。間充質(zhì)干細胞移植有效阻止免疫系統(tǒng)對器官的攻擊。2月1日，患者血漿天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶活性和肌紅蛋白分別激增至57 U/L、513 U/L和138 ng/ml，表明肝臟和心臟遭受嚴重損害；但這些功能性生化指標的水平均在移植后2?4天降至正常參考值，2月13日恢復至正常水平，分別為19 U/L，40 U/L和43 ng/ml。另外，MSC移植能顯著加快治療進程。移植后4天，新冠肺炎危重癥患者呼吸頻率降至正常范圍、發(fā)燒和呼吸急促等癥狀消失。移植后9天，胸部CT成像顯示毛玻璃樣混濁和肺炎浸潤已大大減少。危重患者肺部影像學顯示癥狀改善3. 有效規(guī)避細胞因子風暴研究者通過質(zhì)譜流式分析發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞移植后，導致細胞因子風暴的元兇——過度活化的免疫細胞CXCR3 + CD4 + T細胞、CXCR3 + CD8 + T細胞和CXCR3 + NK細胞在3-6天內(nèi)消失。另外，CD14 + CD11c + CD11bmid調(diào)控的樹突狀細胞數(shù)量急劇增加。另外，與安慰劑對照組相比，MSC治療組的TNF-α水平顯著降低而IL-10水平升高。以上結(jié)果在重癥患者中尤其顯著。輕癥和危重癥患者外周血細胞分析4. 間充質(zhì)干細胞本身不會感染新冠病毒研究者對患者體內(nèi)移植的間充質(zhì)干細胞作RNA測序，發(fā)現(xiàn)其不表達新冠病毒受體ACE2或TMPRSS2。此外，抗炎和營養(yǎng)因子如TGF-β、HGF、LIF、GAL、NOA1、FGF、VEGF、EGF、BDNF和NGF等在MSC中高表達，進一步證明了其免疫調(diào)節(jié)和保護功能。此外，SPA和SPC在MSC中也高度表達，提示MSC后續(xù)分化為新冠病毒易感的肺泡2型細胞的潛在可能性。 移植患者血漿細胞因子的改變本研究為新冠肺炎重癥患者提出了除激素治療、抗炎治療以外的新思路，運用成熟的間充質(zhì)干細胞移植技術(shù)有效規(guī)避細胞因子風暴，大大減少副作用，并顯著促進治療的進展。該方法的安全可靠性已經(jīng)臨床實踐檢驗，為降低新冠重癥、危重癥患者的死亡率提供新的希望！參考文獻：Zikuan Leng, et al. Transplantation of ACE2- mesenchymal stem cells improves the outcome of patients with COVID-19 pneumonia. ChinaXiv. 28 Feb, 2020.張禮翼，等. 間充質(zhì)干細胞在器官移植中發(fā)揮免疫抑制作用及機制探討的研究進展. 器官移植. 2019.點擊查看原文

武漢大學人民醫(yī)院、武漢市金銀潭醫(yī)院、深圳市第三人民醫(yī)院等機構(gòu)的研究人員從血型角度出發(fā)，試圖找出ABO血型與COVID-19易感性的聯(lián)系。先前已有病毒感染的易感性與血型相關(guān)的研究。如諾如病毒和乙型肝炎有明確的血型敏感性，也有報道稱O型血的人被SARS冠狀病毒感染機會較低。 這項新研究發(fā)現(xiàn)，A型血的人更容易感染，O型血的人相對風險更低。相關(guān)研究成果以“Relationship between the ABO Blood Group and the COVID-19 Susceptibility”為題發(fā)表在預印本平臺medRxiv上。值得注意的是，這是首個新冠病毒（SARS-Cov-2）感染和血型關(guān)系的研究。具體來說，研究人員共納入1775例武漢金銀潭醫(yī)院COVID-19患者（包含206例死亡病例）、113例武漢大學人民醫(yī)院COVID-19患者、285例深圳第三人民醫(yī)院COVID-19患者的ABO型血液樣本，并以武漢3694名和深圳23386名正常人最近兩次ABO血型分布調(diào)查作為對照組。統(tǒng)計分析采用的方法是單因素方差分析 (one-way ANOVA)和雙尾(2-tailed)卡方檢驗。作者還采用隨機效應(yīng)模型(REM)，對不同醫(yī)院的數(shù)據(jù)進行Meta分析，置信區(qū)間為95%，并且計算了OR值。結(jié)果顯示，武漢市3694名正常人的ABO血型百分比分別為，A型32.16％、B型24.90％、AB型9.10％、O型33.84％。武漢市金銀潭醫(yī)院的1775例COVID-19患者的ABO血型百分比分別為，A型37.75％、B型26.42％、AB型10.03％、O型25.80％。總結(jié)來說， 不同血型人群感染SARS-CoV-2的相關(guān)風險也不同。A型血與風險增加相關(guān)，而O型血與風險降低相關(guān)。該研究成果還需要進一步研究來證明，但其對于臨床有著積極的意義：(1) A型血患者可能需要特別加強個人防護以減少感染的機會；(2) A型血患者感染SARS-CoV-2可能需要更警惕的監(jiān)測和積極的治療；(3)作為SARS-CoV-2感染管理的常規(guī)部分，在患者和醫(yī)務(wù)人員中引入ABO血型分型可能會有所幫助。查看原文

在該研究中，收集了公共數(shù)據(jù)集（大量RNA-seq和單細胞RNA-seq）發(fā)現(xiàn)ACE2在胰腺（外分泌腺和胰島中）的表達和分布。而且，包括輕度和重度COVID-19患者在內(nèi)的臨床數(shù)據(jù)表明存在輕度胰腺炎。在這67例嚴重病例中，有11例（16.41％）的患者的淀粉酶和脂肪酶水平升高，有5例（7.46％）的患者顯示胰腺影像學改變。在54例輕度病例中，只有一名患者（1.85％）顯示淀粉酶和脂肪酶水平升高，而沒有影像學改變。該研究揭示了COVID-19患者輕度胰腺損傷的現(xiàn)象和可能的原因。這表明SARS-CoV-2感染后的胰腺炎也應(yīng)在臨床工作中予以重視。

2月5日，復旦大學生物醫(yī)學研究院藍裴、樊嘉等人在bioRxiv上發(fā)表研究成果未經(jīng)同行評議論文，發(fā)現(xiàn)新冠肺炎患者可能出現(xiàn)肝損傷并建議進行專門的肝功能護理。 基于兩項獨立的單細胞測序數(shù)據(jù)，研究者在健康人類肝臟和大腸癌患者的肝臟樣本中，均發(fā)現(xiàn)了ACE2在肝內(nèi)膽管上皮細胞中的特異性表達。膽管上皮細胞在肝再生和免疫反應(yīng)中有關(guān)鍵作用。這意味著2019-nCov可能不會靶向肝細胞，或至少不會通過ACE2靶向肝細胞。因此，其導致的肝損害，可能是由于病毒感染了膽管細胞，而非直接感染肝細胞。研究人員指出，2019-nCov肺炎患者出現(xiàn)肝功能異常，可能是由治療中使用的藥物引發(fā)，或由肺炎引起的全身性炎癥反應(yīng)所致。 

針對體溫檢測只能檢測已有癥狀感染者，核酸檢測需要相關(guān)配套設(shè)備且時間較長的問題，在廣西科技廳疫情應(yīng)急管理項目的支持下，學校“廣西八桂學者”陳真誠教授團隊放棄寒假，迎難而上，勇于擔當，聯(lián)合桂林世康醫(yī)療科技有限公司于2月初開始日以繼夜地聯(lián)合攻關(guān)。經(jīng)過多次試驗篩選出最佳的實驗配方和合理的制備工藝，并于2月12日成功研制出一款專門用于新型冠狀病毒快速檢測試紙，在桂林市疾控中心和南寧第四人民醫(yī)院等定點醫(yī)院進行了批量臨床樣本測試，檢測時間僅需10分鐘，臨床測試結(jié)果與核酸檢測結(jié)果匹配度達到100%，目前科研成果正在重慶大學附屬醫(yī)院和解放軍總醫(yī)院派駐武漢醫(yī)療隊進行更大范圍測試。

南方科技大學與深圳國家感染性疾病臨床醫(yī)學研究中心/南方科技大學第二附屬醫(yī)院（深圳市第三人民醫(yī)院）等聯(lián)合，從臨床新冠肺炎病例獲取生物樣本，首次使用冷凍電子顯微鏡觀察到了新冠病毒經(jīng)滅活后的真實形貌，為新冠病毒的識別、鑒定和臨床相關(guān)研究提供重要的超微影像基礎(chǔ)。該成果于當?shù)貢r間2020年3月5日發(fā)布在生物領(lǐng)域最大的預印本發(fā)行服務(wù)BioRxiv上。自從2019年底新冠肺炎疫情爆發(fā)以來，南方科技大學冷凍電鏡中心與深圳國家感染性疾病臨床醫(yī)學研究中心/南方科技大學第二附屬醫(yī)院（深圳市第三人民醫(yī)院）等成立聯(lián)合研究團隊，啟動對新冠病毒感染肺炎以及新冠病毒分離、培養(yǎng)、鑒定及結(jié)構(gòu)解析等系統(tǒng)性研究分析。聯(lián)合研究團隊依托南方科技大學第二附屬醫(yī)院（深圳市第三人民醫(yī)院）生物安全III級實驗室條件，在2020年1月27日從1名新冠肺炎患者肺泡灌洗液中分離出病毒株，并迅速完成基因組測序和鑒定，及時向全球流感信息共享平臺（GISAID注冊編號：EPI_ISL_406594）注冊共享信息，把其命名為“BetaCoV/Shenzhen/SZTH-003/2020”的新冠毒株。隨后進一步完善了實驗室病毒擴增、純化及滅活技術(shù)，并綜合應(yīng)用間接免疫熒光法（IFA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、和基因組序列與譜系分析多種方案核實和確認滅活的新冠病毒。隨后南方科技大學冷凍電子顯微鏡中心專家，利用冷凍電子顯微鏡分析技術(shù)，不僅首次觀察到了真實的新冠病毒經(jīng)滅活后的形貌，并且捕捉到了該病毒侵染宿主細胞中的一個重要中間狀態(tài)。此時病毒正處于識別和附著宿主細胞后，準備與細胞發(fā)生融合的時期。經(jīng)國內(nèi)外文獻檢索，這是新冠肺炎疫情爆發(fā)以來，科研工作者首次在冷凍電子顯微鏡下觀察到新冠病毒全病毒的真實形貌。冷凍電子顯微鏡避免了常溫電子顯微鏡對生物樣品的脫水、染色等破壞作用，最大限度地保持了生物樣品生理狀態(tài)下的真實形貌。聯(lián)合研究團隊現(xiàn)正在進一步揭示新冠病毒超微結(jié)構(gòu)、病毒侵染人類宿主細胞的特性、與新冠肺炎臨床預后關(guān)系。在深圳市的大力支持下，聯(lián)合研究團隊正在打造高等級生物安全臨床冷凍電子顯微鏡研究平臺，全力推進新冠病毒以及其他致命性病毒的超微結(jié)構(gòu)生物學研究，為傳染病病原鑒定、公共衛(wèi)生突發(fā)事件防控和潛在的抗體、疫苗和新藥研發(fā)提供堅實的科學基礎(chǔ)。