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本熒光標記瘤胃細菌技術操作簡便、成本低、適于實驗室測定瘤胃原蟲吞噬速率所用，該方法的使用將有助于打開瘤胃內微生物循環的“黑箱”， 促進瘤胃微生態及宿主 AA營養的研究。

涉及一種血管活性腸肽的融合蛋白，所述融合蛋白包含 1 個人血 清白蛋白(Albumin Human，HSA)和 1 個血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP),該融合蛋白所具有的獨特的氨基酸序列可以 保證其在宿主體內高水平穩定表達，在保留 VIP 原有功能的同時，體 內半衰期顯著延長。本發明同時提供該融合蛋白的制備方法及其在制 備抗炎、抗損傷、腦血管疾病、提高睡眠質量的藥物中的應用。

一、項目分類 關鍵核心技術突破 二、成果簡介 蛋白質類材料具有良好的生物相容性和優異的生物活性，在醫用材料領域有著廣泛的應用。多種材料已在臨床前動物實驗中證實了其優異的生物活性。現有蛋白材料多從天然生物來源中提取，理化性質不穩定，材料性質難以理性設計。本技術利用合成生物學技術和化學修飾技術，建立了從分子結構到材料性質均能理性設計的蛋白材料研發平臺，發展了多種具有智能響應性和獨特理化性質的生物醫用蛋白材料，包括具有非天然催化活性的酶制劑、能夠用于傷口修復和藥物緩釋的可注射蛋白凝膠、多功能靶向抗腫瘤蛋白納米藥物、3D打印蛋白植入材料等。

本品治療骨質疏松的療效比國內外的鈣制劑，活性VD及降鈣素藥物在提高骨密度（BMD）與骨礦含量（BMC）上占優勢，可補充因年齡增長而喪失的骨基質的有機成分，恢復有機成分與無機成分二者的平衡，促進骨膠原纖維與羥基磷灰石的結合，使骨堅硬而富有彈性，增加或維持骨量，因而減少骨折的發生，緩解骨質疏松而引起的骨痛，總有效率達90%。緩解因缺鈣而造成的小腿肌肉痙攣，總有效率達92%。

本成果所述融合蛋白包含1個人血清白蛋白（Albumin Human，HSA)和1個血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）,該融合蛋白所具有的獨特的氨基酸序列可以保證其在宿主體內高水平穩定表達，在保留VIP原有功能的同時，體內半衰期顯著延長。

產品介紹： 蛋白層析系統JP-blupadStart主要用于分子生物，能夠開展各種常用的純化技術，如親和層析、離子交換層析、脫鹽和緩沖液交換，以及凝膠過濾。 產品特點： 無需預熱，開機基線即可平衡； 高清10.1寸觸摸屏工業電腦小巧緊湊； 流通式電導檢測器獨立設計；中英文操作界面可互換，操作簡單，易于學習和使用；可根據您的需求預設程序進行操作； 數據實時自動保存，可防止意外斷電導致的數據丟失；采用高精度的恒流泵，可以實時在線修改梯度和流速；配置高靈敏的固定波長紫外檢測器；支持餾分收集器、全收集、AU值以及電導收集。 實驗數據支持Excel導出； 雙通道收集閥： 1個收集，1個廢液口 技術參數： 型號 JP-blupadStart 系統泵： 恒流泵可提供連續、穩定的精準流速 流速范圍： 0.1~10 mL/min 極限耐壓： 壓力3bar 混合器： 靜態，0.6mL 流速精度： ±1.2% 梯度類型： 等度、步進梯度，可在線修改梯度比例 紫外檢測器： JP-blupad波長260nm、280nm(標配）可選配310nm、定制波長 光源： LED冷光源 波長精度： ±1nm 檢測范圍： -6AU到+6AU，線性：±1.5%，在 0–2AU 之間； 樣品池體積： 10ul—120ul可選 電導檢測器： 范圍：0.001-400.00mS/cm，精度：±2%可對電導及溫度進行補償 溫度檢測器： 檢測范圍 0-100℃，精度±1℃ 進樣閥： 手動控制切換Load、Inject、Waste功能，支持定量環和定量杯進樣 層析工作站： 同一屏幕畫面顯示：UV、梯度譜線、溫度、電導率、收集試管號 安裝工具包： PEEK/PTFE 管道,安裝手冊，用戶說明書， 管道接頭，常用工具等 電源： 220VAC 工作溫度： 4-40℃ 收集裝置： JP-blupadFC支持不同規格的收集支架 收集方式： 手動、全收集、峰收集 外觀尺寸（mm） 405x340x478   - 無論您是進行標簽蛋白或者天然蛋白，抗體的純化，您必須使所有的一切簡單起來。from- JP-blupadStart  

生物系黃鴻達課題組博士后汪娜等解析了VASH2-SVBP復合物的晶體結構，并且通過生化和細胞實驗證明SVBP不僅能夠幫助VASH2進行正確的表達和折疊，而且對于VASH2進行a-微管蛋白C末端去酪氨酸化的功能也起到至關重要的作用。團隊還獲得了VASH2-SVBP與兩種抑制劑（epoY和TPCK）的復合物晶體結構，闡明了這些抑制劑的抑制機理。此后，團

傳統的提取物質中有效成份的方法，如水蒸汽蒸餾法、減壓蒸餾法、溶劑萃取法等，其工藝復雜、產品純度不高，而且易殘留有害物質。超臨界流體萃取是一種新型的分離技術, 它是利用流體在超臨界狀態時具有密度大、粘度小、擴散系數大等優良的傳質特性而成功開發的。它具有提取率高、產品純度好、流程簡單、能耗低等優點。CO2- SFE技術由于溫度低, 且系統密閉, 可大量保存對熱不穩定及易氧化的揮發性成分, 為中藥揮發性成分的提取分離提供了目前最先進的方法。用超臨界CO2萃取法可以從許多種植物中提取其有效成分，而這些成分過去用化學方法是提取不出來的。這項技術除了用在化工、醫藥等行業外，還可用在煙草、香料、食品等方面。如食品中，可以用來去除咖啡、茶葉中的咖啡因，可提取大蒜素、胚芽油、沙棘油、植物油以及醫藥用的鴉片、阿托品、人參素及銀杏葉、紫杉中的有價值成分。可見這項技術在未來具有廣闊的發展前景。 超臨界流體萃取的特點　1．萃取和分離合二為一，當飽含溶解物的二氧化碳超臨界流體流經分離器時，由于壓力下降使得CO2與萃取物迅速成為兩相（氣液分離）而立即分開，不存在物料的相變過程，不需回收溶劑, 操作方便；不僅萃取效率高，而且能耗較少，節約成本。 　2．壓力和溫度都可以成為調節萃取過程的參數。臨界點附近，溫度壓力的微小變化，都會引起CO2密度顯著變化，從而引起待萃物的溶解度發生變化，可通過控制溫度或壓力的方法達到萃取目的。壓力固定，改變溫度可將物質分離；反之溫度固定，降低壓力使萃取物分離；因此工藝流程短、耗時少。對環境無污染，萃取流體可循環使用，真正實現生產過程綠色化。　　3．萃取溫度低, CO2的臨界溫度為31.265℃ ,臨界壓力為 7.18MPa, 可以有效地防止熱敏性成分的氧化和逸散，完整保留生物活性，而且能把高沸點，低揮發渡、易熱解的物質在其沸點溫度以下萃取出來。　　4. 臨界CO2 流體常態下是氣體, 無毒, 與萃取成分分離后, 完全沒有溶劑的殘留, 有效地避免了傳統提取條件下溶劑毒性的殘留。同時也防止了提取過程對人體的毒害和對環境的污染, 100%的純天然。　5．超臨界流體的極性可以改變, 一定溫度條件下, 只要改變壓力或加入適宜的夾帶劑即可提取不同極性的物質, 可選擇范圍廣。超臨界流體萃取技術的應用 本課題組現已完成：（1）從甜橙皮中萃取甜橙油（2）從銀杏浸膏中萃取銀杏內酯（3）發酵液制得乳酸鈣中萃取還原糖、蛋白質（4）發酵液制得乳酸鈣中萃取重金屬離子 本課題組可承接： 紫杉、黃芪、人參葉、大麻、香獐、青蒿草、川貝草、桉葉、玫瑰花、樟樹葉、茉莉花、花椒、八角、桂花、生姜、大蒜、辣椒、桔柚皮、啤酒花、芒草、香茅草、鼠尾草、迷迭香、丁子香、豆蔻、沙棘、小麥、玉米、米糠、魚、煙草、茶葉、煤、廢油等有價值組分的提純或回收。 在超臨界流體技術中，超臨界流體萃取技術與天然藥物現代化關系密切。SFE對非極性和中等極性成分的萃取，可克服傳統的萃取方法中因回收溶劑而致樣品損失和對環境的污染，尤其適用于對溫熱不穩定的揮發性化合物提取；對于極性偏大的化合物，可采用加入極性的夾帶劑如乙醇、甲醇等，改變其萃取范圍提高抽提率。

天然黃酮、功能糖的提取制備與功能產品開發   1、核心技術介紹： 多糖（polysaccharide）是由多個單糖分子縮合、失水而形成的由糖苷鍵結合的糖鏈，是一類分子結構復雜且龐大的高分子碳水化合物。多糖組成與結構十分復雜，不是一種純粹的化學物質，而是聚合程度不同的物質的混合物。多糖是一類具有廣泛生物活性的生物大分子，具有多種藥理活性，如抗氧化、降血糖、降血脂、抗腫瘤以及增強免疫力等，具有較高的開發價值。植物多糖種類繁多，具有多途徑和多靶點作用等優勢，在保健食品和醫藥等方面具有廣闊的應用前景。掌葉覆盆子(拉丁名：Rubus chingii Hu)，又稱華東覆盆子、大號角公、牛奶母等，薔薇科懸鉤子屬植物，分布于江蘇、安徽、浙江、江西、福建，等地。未成熟果實可入藥，《中國藥典》記載其性微溫，味甘、酸，入肝腎經，具補肝腎、縮小便、助陽固精，明目之功效，主治陽痿、遺精、虛勞、目暗等癥。覆盆子的營養成分豐富，富含鞣花酸、維生素、多糖、多酚、黃酮等功能性化合物。其中，覆盆子多糖具有廣泛的藥理作用，如抗氧化、抗衰老、降壓、提高免疫力等功效。然而目前覆盆子多糖提取純化步驟復雜；同時因采用堿法提純，易破壞多糖的結構，多糖損失較大。有研究通過聚酰胺柱和DEAE—纖維素陰離子柱純化多糖，然而通過柱純化的步驟繁雜，且原材料價格昂貴。目前，尚未發現高純度掌葉覆盆子多糖的快速提取方法。為更好地對覆盆子多糖進行開發利用，項目團隊綜合利用超微粉碎、超聲輔助浸提、分子截留和真空冷凍干燥等技術，制備獲得高純度、高活性掌葉覆盆子多糖，為掌葉復盆子多糖的產業化應用提供技術支撐。項目完成人團隊在天然黃酮和植物多糖分離純化及其調控糖脂代謝、緩解氧化應激、保護肝臟損傷等領域累計申請發明專利40余件，其中授權發明專利14件，2項PCT專利申請中。目前項目完成人研究團隊在涉及植物化學素分離純化領域到活性應用已經形成了國內外全覆蓋專利群，通過全球專利布局，有效保護了該核心自主知識產權。 2、應用范圍及目前應用狀態 本項目研發的基于超微粉碎、超聲輔助浸提、分子截留和真空冷凍干燥等技術的快速、高純度植物多糖提取技術適用于富含多糖的植物農產品，包括但不限于如下產品：掌葉復盆子、蓮霧、桑葚、紅棗和香菇等。目前已建立植物多糖的中試生產線，可完成小批量植物多糖的生產，開發以植物多糖為核心元素的功能產品。 3、掌葉復盆子多糖結構及活性介紹 活性多糖是指具有某種特殊生理活性的多糖化合物，具有雙向調節人體生理節奏的功能，廣泛存在于植物和微生物細胞壁中，安全性高、功能廣泛，具有非常重要與特殊的生理活性，是由醛基和羰基通過苷鍵連接的高分子聚合物，也是構成生命的四大基本物質之一。多糖除有免疫調節、抗腫瘤生物學效應外, 還有抗衰老、降血糖、抗凝血等作用, 且對機體毒副作用小。本項目開發的掌葉覆盆子多糖主要由半乳糖醛酸組成，以1,3-阿拉伯糖、1,6-半乳糖、T-半乳糖醛酸等糖苷鍵組成，具有抗氧化、抑制脂肪毒性和肝臟損傷等功能活性，具有良好的開發前景，本項目研究為掌葉覆盆子多糖提供了新的醫療用途，拓展了新的應用領域。 以摩爾百分比計，掌葉覆盆子多糖由以下成分組成： 半乳糖醛酸    40.26~45.20%； 阿拉伯糖      29.78~33.17%； 半乳糖        7.63~9.59%； 葡萄糖        6.38~9.65%； 甘露糖        1.18~1.31%； 鼠李糖        3.29~4.89%； 葡糖醛酸      0.98~1.13%； 巖藻糖        0.27~0.65%； 多糖是由單糖以一定的連接方式組成的重復結構單元，單糖以一定的糖苷鍵連接，不同糖苷鍵的連接的單糖稱為多糖的結構單位。以摩爾比計，掌葉覆盆子多糖由以下特定結構單位組成： 1,3-阿拉伯糖    2.49-2.96； 1,6-半乳糖       2.22-2.34； T-半乳糖醛酸    1.76-2.01； 1,6-葡萄糖       1.15-1.27； 1,4 -半乳糖醛酸 1.17-1.26； 1,4,6-半乳糖      1.03-1.21； 1,4-鼠李糖       0.75-1.00； 1,2-阿拉伯糖    0.59-0.80； 1,4-阿拉伯糖    0.48-0.67； T-阿拉伯糖       0.36-0.59； T-葡萄糖醛酸    0.13-0.30； 1,3-巖藻糖       0.18-0.29； 1,3-甘露糖       0.18-0.28； 1,4-葡萄糖醛酸   0.13-0.24。   掌葉覆盆子（Rubus chingii Hu）

依托豐富的發酵、食品、醫藥、中草藥、經濟作物或植物等過程物料分離提取純化的開 發、工程經驗，本平臺積累了豐富的上述領域生理活性物質或天然產物分離提取技術、工藝 包、裝備選型、工程設計經驗和資料庫，可為合作伙伴提供成熟工藝技術或中試階段起步技術 開發，實現具有國內領先水平的工藝技術應用，產生顯著經濟效益。