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評估基因編輯工具酶的新方法以及高保真的新基因編輯酶
CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)是目前最常用的基因編輯工具酶，在科研領域被廣泛應用，而在臨床方面的應用因為其脫靶活性一度停滯不前。它通過guide RNA（gRNA）與靶向DNA序列的配對，從而將Cas9錨定在靶向基因并誘導產生DNA雙鏈斷裂（DSB）。在基因編輯誘發的DSB的修復過程中，一定幾率會產生基因突變或者外源DNA片段的插入，從而達到基因編輯的目的。在實際應用過程中，一個好的基因編輯酶Cas9需要同時滿足高效切割靶位點、低脫靶活性和低染色體異常三個特點。目前在這三個方面，有一部分基于PCR的方法用于估算基因編輯效率，但其結果可靠性有待提高；有一些基于高通量測序的方法可以在體內或者體外檢測基因編輯酶的脫靶活性；尚無系統的可定量的測量基因組異常結構的方法。本項目開發了一種新的方法，可以用來同時定量檢測Cas9編輯效率和脫靶活性以及編輯引起的染色體異常結構，即primer-extension-mediated sequencing（PEM-seq）。這是對基因編輯和DNA損傷修復等領域都有巨大促進作用的新技術。與此同時，該項目包括了該團隊利用PEM-seq篩選出的一個相比于現有Cas9變體具有更低脫靶活性且與野生型Cas9切割效率相當的Cas9變體further enhanced Cas9 (FeCas9)。
北京大學
2021-02-01
一種幾丁質合酶及其基因和應用
本發明涉及幾丁質合酶，特別涉及卵菌門中的幾丁質合酶，其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在75％以上，優選在80％以上，更優選在90％以上，最優選在95％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述幾丁質合酶的活性水平能夠調節卵菌的活性孢子囊和活性游動孢子的產量從而影響卵菌的致病力或寄主的發病程度。
中國農業大學
2021-04-11
辣椒疫霉病菌幾丁質合酶及其基因和應用
本發明涉及辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)中的幾丁質合酶。其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在90％以上，優選在95％以上，更優選在98％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述辣椒疫霉病菌的幾丁質合酶的活性水平能夠調節活性孢子囊和活性游動孢子的產量從而影響辣椒疫霉病菌的致病力或寄主的發病程度。
中國農業大學
2021-04-11
轉阿特拉津氯水解酶基因的研究
阿特拉津是常用除草劑，也是內分泌干擾劑，降解阿特拉津的酶為阿特拉津氯水解酶，全世界報道其基因僅兩家單位，美國一家，中國南開大學一家。轉阿特拉津氯水解酶基因有三點主要應用價值：轉基因作物在阿特拉津噴施的田地中能正常生長、提高制種純度（如雜交水稻）、修復阿特拉津環境污染。
南開大學
2021-04-10
一種端粒酶啟動基因表達方法及其應用
本發明公開了一種端粒酶啟動基因表達方法(Telomerase?Activating gene Expression，Tage)及其應用，該表達方法基于端粒酶可結合并延長DNA分子末端的端粒酶識別序列，合成新的端粒重復序列的特性，將端粒酶特有的生物學功能與人工轉錄因子調控細胞基因表達技術相結合，發展了Tage新方法。Tage技術在細胞中可以有效發生，人工轉錄因子可激活效應基因在端粒酶陽性細胞中的表達，效應基因的表達產物可有效殺滅腫瘤細胞，本發明證明Tage技術可用于殺滅腫瘤細胞，而對無端粒酶活性的細胞
東南大學
2021-01-12
茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其應用
項目成果/簡介:本發明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其在制備轉基因植物中的應用.本發明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動子序列,然后利用Gateway技術構建重組植物表達載體pKGWFS7TCSP,采用農桿菌介導的煙草遺傳轉化,以表達GUS基因的方式進行啟動子活性功能驗證.本發明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP,并驗證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機理,生物調控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.
安徽農業大學
2021-04-10
茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其應用
本發明提供茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其在制備轉基因植物中的應用.本發明以茶樹DNA為模板,用GenomeWalking方法克隆得到茶樹TCS基因啟動子序列,然后利用Gateway技術構建重組植物表達載體pKGWFS7TCSP,采用農桿菌介導的煙草遺傳轉化,以表達GUS基因的方式進行啟動子活性功能驗證.本發明首次從茶樹中克隆出特異性咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP,并驗證了其活性,對于揭示茶樹咖啡堿合成的機理,生物調控茶樹咖啡堿的含量具有重要意義.
安徽農業大學
2021-04-29
苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(MtXET）及其編碼基因與應用
本發明公開了一種苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(xyloglucanendotransglycosylase，xet)及其編碼基因與應用，所述苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(mtxet)及其編碼基因可以用于調節植物的根系發生發展，由此調節提高植物的抗旱和抗寒能力。本發明的苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶在培育根系更加發達的植物品種中具有重要意義。
北京林業大學
2021-02-01
苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(MtXET）及其編碼基因與應用
項目成果/簡介:本發明公開了一種苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(xyloglucanendotransglycosylase，xet)及其編碼基因與應用，所述苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶(mtxet)及其編碼基因可以用于調節植物的根系發生發展，由此調節提高植物的抗旱和抗寒能力。本發明的苜蓿木葡聚糖轉葡糖苷酶在培育根系更加發達的植物品種中具有重要意義。
北京林業大學
2021-01-12
南極假絲酵母脂肪酶Ｂ基因及其在酵母展示中的應用
該專利首次利用畢赤酵母細胞展示技術，通過酵母細胞壁蛋白融合表達的方法，實現了脂肪酶分子的細胞自固定化，有效地解決了脂肪酶進一步加工與應用過程的穩定性；利用酵母細胞展示的一步酶固定化技術，減少了傳統固定化酶方法的酶分離純化的步驟和損失，解決了酶在使用過程的回收及反復使用的問題；將細胞展示脂肪酶的產酶水平進一步提高達到國際先進水平，為脂肪酶的在食品、飼料等領域的高效應用提供了保證；參評專利在芳香酯生產、白酒釀造及脂酶復合飼料酶制劑生產等領域實施應用，有效推動了行業技術進步和應用企業產品在國內外的競爭力，近3年相關產品新增總銷售額7.29億元，實現利稅1.34億元。獲得了第十九屆中國專利獎。
華南理工大學
2021-04-10