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項(xiàng)目成果/簡介:在中國癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長趨勢，癌癥的治療效果不令人滿意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個主要問題，一是靶向藥物的適用性問題，其治療效果與患者的基因突變類型密切相關(guān)，需要通過腫瘤患者的基因突變檢測來篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問題，一般靶向藥物使用幾個月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測來指導(dǎo)靶向藥物的個性化治療，并且在治療過程中通過對耐藥基因的檢測了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無效用藥，節(jié)約社會成本。顯然采用靶向藥物的個性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測過程中會出現(xiàn)無樣可取的情況；同時(shí)由于檢測靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測，不能同時(shí)檢測多種點(diǎn)突變，由于突變種類較多，臨床檢測操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對現(xiàn)有檢測技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測技術(shù)使基因突變檢測靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測對象，并且可同時(shí)檢測多種點(diǎn)突變，簡化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開發(fā)可以血液和組織樣品為檢測對象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。應(yīng)用范圍:與目前存在的基因突變檢測技術(shù)相比，本項(xiàng)目所采用的檢測技術(shù)具有更廣泛的適用性。本項(xiàng)目所采用的技術(shù)以病人血液為主要檢測標(biāo)本，可適用于所有肺癌和結(jié)直腸癌病人。由于具有高度的靈敏度和特異性，可在高野生型基因背景下進(jìn)行檢測，解除了傳統(tǒng)檢測技術(shù)對病人標(biāo)本的限制。血液標(biāo)本采樣簡單方便，與手術(shù)穿刺相比，極大的減輕了病人痛苦，也降低了取樣的成本，更容易得到病人的配合。對于繼發(fā)性耐藥的病人而言，使動態(tài)實(shí)時(shí)檢測耐藥基因稱為可能。項(xiàng)目階段:試驗(yàn)階段效益分析:與目前存在的基因突變檢測技術(shù)相比，本項(xiàng)目研究采用的基因突變檢測技術(shù)具有更高的靈敏度和特異性，靈敏度可達(dá)到0.1％，即可在大于103個野生型基因的背景下檢測到一個突變基因。本項(xiàng)目研究已在基因突變檢測方面積累了一定經(jīng)驗(yàn)，已完成了對EGFR和K-ras基因檢測的實(shí)驗(yàn)室研發(fā)工作，前期的研究結(jié)果顯示，采用本項(xiàng)目的技術(shù)方法檢測EGFR 29種常見突變和K-ras基因8種常見的突變至少可達(dá)到0.1%的檢測選擇性，具有高度的靈敏度和特異性，并且可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測8種類型K-ras點(diǎn)突變，這是目前其他ARMS技術(shù)所無法達(dá)到的。并且采用本項(xiàng)目技術(shù)，我們進(jìn)一步研發(fā)了針對肺癌和結(jié)直腸癌靶向治療的EGFR C797S、braf、PIK3CA等突變檢測的試劑盒，其中EGFR C797S突變檢測試劑盒目前尚無上市產(chǎn)品，C797S為靶向藥物治療過程中產(chǎn)生的突變，可用于靶向藥物的耐藥監(jiān)測，以便及時(shí)指導(dǎo)病人改變治療方案。

鹽堿地是影響我國農(nóng)業(yè)增產(chǎn)的主要因素之一。近年來植物分子生物學(xué)研究表明，植物中存在耐鹽（抗鹽）基因，如果能將耐鹽基因克隆，然后通過遺傳轉(zhuǎn)化導(dǎo)入目標(biāo)植物，可以有效提高目標(biāo)植物的耐鹽性。我們從植物中克隆到了耐鹽相關(guān)基因，目前的研究工作正在將耐鹽基因?qū)肽敛莅ㄜ俎！倜}根等植物中，已得到大量的遺傳轉(zhuǎn)化植株。

在中國癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長趨勢，癌癥的治療效果不令人滿意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個主要問題，一是靶向藥物的適用性問題，其治療效果與患者的基因突變類型密切相關(guān)，需要通過腫瘤患者的基因突變檢測來篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問題，一般靶向藥物使用幾個月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測來指導(dǎo)靶向藥物的個性化治療，并且在治療過程中通過對耐藥基因的檢測了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無效用藥，節(jié)約社會成本。顯然采用靶向藥物的個性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測過程中會出現(xiàn)無樣可取的情況；同時(shí)由于檢測靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測，不能同時(shí)檢測多種點(diǎn)突變，由于突變種類較多，臨床檢測操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對現(xiàn)有檢測技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測技術(shù)使基因突變檢測靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測對象，并且可同時(shí)檢測多種點(diǎn)突變，簡化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開發(fā)可以血液和組織樣品為檢測對象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。

本實(shí)用公開了一種生物基因提取研磨裝置，包括移動件和圓柱形且內(nèi)部中空的下殼體，下殼體的頂端開口設(shè)置，所述移動件包括圓柱形的研磨塊和軸線處設(shè)有豎直穿孔的圓柱，研磨塊的頂端和豎直桿的底端同軸固定，豎直桿的頂端穿過圓柱上的豎直穿孔并延伸至圓柱的上方，圓柱側(cè)邊的下部設(shè)有外凸螺紋，圓柱的頂端和豎直桿側(cè)邊通過連動件連接，下殼體內(nèi)壁的中上部開設(shè)有內(nèi)陷螺紋，外凸螺紋和內(nèi)陷螺紋相嚙合，研磨塊的直徑和下殼體內(nèi)壁的直徑相

棉花是我省東部沿海地區(qū)最重要的經(jīng)濟(jì)作物。轉(zhuǎn)基因棉花的種植面積近年迅速擴(kuò)大，但是轉(zhuǎn)基因棉籽目前沒有得到適當(dāng)?shù)拈_發(fā)利用。南京工業(yè)大學(xué)對菜籽棉籽等含油含毒種籽的開發(fā)利用研究已經(jīng)有

通過基因分析以及細(xì)胞和斑馬魚模型實(shí)驗(yàn)，證實(shí)DDX24基因突變導(dǎo)致了該家族患者的內(nèi)臟血管畸形，并將其命名為多器官靜脈淋巴管畸形綜合征。后續(xù)通過基因診斷和靶向治療，該家族兩名本已病入膏肓的患者目前臨床癥狀得到明顯改善。       除以上發(fā)現(xiàn)外，依托大科研平臺優(yōu)勢以及大學(xué)附屬醫(yī)院豐富的臨床資源，單鴻教授團(tuán)隊(duì)還收集了近500例散發(fā)病例進(jìn)行深入研究并揭示：DDX24突變不僅限于上述家系的患者中，還存在于具有相似畸形血管表型的散發(fā)病例中，且檢出率高達(dá)17%，提示該基因在血管畸形中的重要作用。       血管畸形發(fā)病率高，絕大部分發(fā)病機(jī)制不明，診斷和治療均存在很大困難；尤其是內(nèi)臟血管畸形，由于發(fā)病部位隱匿，主要依賴MRI、CT等影像檢查發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)病人就診時(shí)已發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥。       血管畸形致病基因DDX24的發(fā)現(xiàn)為臨床研究提供了新方向，有望成為血管畸形新的診斷依據(jù)和治療靶點(diǎn)。

利用全基因組芯片對52對驅(qū)動基因陰性肺腺癌腫瘤組織和相鄰正常組織進(jìn)行候選基因的篩選，通過KEGG信號通路富集分析發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號通路在驅(qū)動基因陰性肺腺癌中高度激活，并得到41個Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)的差異表達(dá)基因。在實(shí)驗(yàn)階段，課題組運(yùn)用組織芯片技術(shù)(TMAs)和LASSO Cox回歸分析進(jìn)一步對41個候選基因進(jìn)行篩選，最終構(gòu)建了一個由CTNNB1、SOX9、DVL3和Wnt2b組成的預(yù)后相關(guān)classifier（CSDW）。依據(jù)CSDW classifier,驅(qū)動基因陰性肺腺癌患者可被分為高風(fēng)險(xiǎn)組和低風(fēng)險(xiǎn)組，并且高風(fēng)險(xiǎn)患者的總生存率顯著差于低風(fēng)險(xiǎn)患者（[HR]10.42,6.46-16.79;p<0.001）。在驗(yàn)證階段，課題組收集了內(nèi)部驗(yàn)證組樣本和兩個獨(dú)立的外部驗(yàn)證組樣本。經(jīng)過驗(yàn)證分析，CSDW classifier被證實(shí)可作為預(yù)測驅(qū)動基因陰性肺腺癌患者預(yù)后的可靠工具，同時(shí)為驅(qū)動基因陰性肺腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)。

一、成果簡介 從全球來看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)在經(jīng)歷了技術(shù)成熟期和產(chǎn)業(yè)發(fā)展期之后，目前已進(jìn)入了搶占技術(shù)制高點(diǎn)與培育經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)為目標(biāo)的戰(zhàn)略機(jī)遇期，圍繞基因、人才和市場的國際競爭正日趨白熱 化。我國雖在大力發(fā)展轉(zhuǎn)基因技術(shù)，但是我國的轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的分子檢測監(jiān)測技術(shù)體系尚未完善，無法應(yīng)對國內(nèi)自主研發(fā)產(chǎn)品急需產(chǎn)業(yè)化的需求和國外產(chǎn)品進(jìn)口安全評價(jià)和檢測監(jiān)測的需求。鑒于我 國轉(zhuǎn)基因生物分子檢測的標(biāo)準(zhǔn)化

 1. 技術(shù)特色：1.1與動物提取的膠原蛋白相比，基因工程技術(shù)生產(chǎn)的膠原蛋白具有明顯的優(yōu)點(diǎn)：(1) 無病毒隱患：從動物組織中提取的膠原蛋白由于動物組織本身可能攜帶病毒（瘋牛病。豬瘟疫等），而使膠原蛋白產(chǎn)品存在病毒隱患。運(yùn)用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的膠原蛋白從根本上避免的該問題。（2）低排異反應(yīng)：重組膠原蛋白有很好的生物相容性。（3）動物提取的膠原蛋白經(jīng)過水解破壞