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1 成果簡介本項成果針對目前全球共同關心的腫瘤、傳染病、內分泌等重大疾病快速檢測問題，建立相關疾病診斷所需的高靈敏度化學發光免疫分析新方法，研制了一系列可用于臨床分析的化學發光免疫分析試劑盒。 所建立的方法操作簡單，線性范圍寬，成本低，可以實現大規模的樣品調查和篩選。本項成果包括基于磁顆粒的多種標志物的快速聯合檢測技術，研制高通量、 快速臨床診斷試劑盒和全自動化學發光免疫分析儀的關鍵裝置。可以實現腫瘤、傳染病、內分泌等系列化學發光免疫分析試劑的產業化。研究成果已部分應用于臨床檢驗。2 應用說明微板式磁化學發光酶免疫分析（ MMCLEIA）方法。以磁性微粒子為載體，采用磁性微粒子表面包被技術和免疫反應的特點，以磁性酶免疫測量分析為模型，建立了微板式磁化學發光酶免疫分析法。能夠較好地應用于血清以及尿液中不同生物標記物成分的分析。 用改良的戊二醛交聯法完成堿性磷酸酶（ ALP） 對抗體的標記，所得酶結合物保持了單克隆抗體的免疫反應性和酶的催化活性。 采用 4-甲氧基-4-（ 3"-磷酰氧基苯） -螺旋-（ 1， 2-二氧雜環丁烷-3， 2'-金剛烷（ AMPPD） -堿性磷酸酶（ ALP） 化學發光體系，并以異硫氰酸熒光素（ FITC） 和 ALP 分別標記疾病標記物的單克隆抗體。在溶液中形成 FITC 標記抗體-抗原-ALP 標記抗體的免疫夾心復合物后，引入偶聯 FITC 抗體的微米級磁性微粒子作為反應體系的分散固相，并最終形成雙夾心免疫復合物。在反復施加磁場的作用下，通過洗滌將沒有結合的游離蛋白與免疫復合物分離，實現對待測抗原的測定。 這一技術可以應用于腫瘤標記物的檢測。3 效益分析化學發光免疫分析由于其高靈敏度、快速、高通量等特點，可以應用于生物樣品的快速檢測，在臨床檢測、環境分析以及食品安全分析等領域一直受到人們的重視。本研究成果及專利技術均從實際需要出發，不需要繁雜的樣品前處理，就可以更方便地檢測出人體或者環境生物樣品中相關物質的含量，這種技術可以用于日常生產和生活中，對人類和動物的身體健康、維持全球生態平衡等方面具有很大的意義。微板式磁性微粒子化學發光免疫分析新技術的開發不僅為腫瘤、傳染病等重大疾病診斷與預防提供強有力的檢測工具，對于發展其他疾病診斷技術和環境雌激素類化合物的檢測也將起到重要作用。因此化學發光免疫分析技術的發展拓寬了免疫分析的應用領域，具有廣闊的市場前景和非常可觀的經濟效益。4 合作方式技術轉讓或合作開發， 商談。5 所屬行業領域醫療衛生。

宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，在女性人群中HPV的感染率在13.5%左右。分子診斷是指應用分子生物學方法檢測患者體內遺傳物質的結構或表達水平的變化而做出診斷的技術。免疫診斷（immunodiagnosis）是應用免疫學的理論、技術和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態。但現有單克隆抗體均無法達到HPV亞型鑒別目的，若干亞型特異性抗體均與其它亞型有交叉反應。迄今為止市場上沒有高危型HPV免疫診斷試劑盒。因此我們開發的HPV免疫診斷試劑盒有望成為第一個高危HPV免疫檢測試劑盒。

HPV (Human Papilloma Virus) 是人乳頭瘤病毒的縮寫，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現為尋常疣、生殖器疣等癥狀。 隨著

研發階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數均達到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎，在國內首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗證明，該試劑盒的靈敏度、準確度和重現性與國外試劑盒水平相當。經多家檢測機構和研究單位的復核和應用表明，該試劑盒

利用現代分子生物學方法對傳統抗血清制備技術進行改造，突破 了過去抗血清生產經驗為主造成的不確定性和不系統性，提高了抗血 清制備的技術含量和生產效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體， 從而實現抗體制備的標準化和規模化生產，同時也降低了生產成本。 免疫磁珠分離技術的最突出的優點是特異性強，可以明顯提高檢 測的靈敏性，縮短病原體的檢測時間一至數天，并且可從復雜的樣品 中直接分離病原體，降低標本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產出 3 種診斷血清產品，包括“致病性大腸桿菌 O 抗原診 斷血清試劑盒”、“大腸桿菌 H 抗原全套診斷血清試劑盒”和“志賀氏菌 O 抗原全套診斷血清試劑盒”，共計 147 種高特異性抗體。 經中 國 CDC 使用證實，該血清具有反應速度快、特異性強的特點，與日 本生研同類血清質量相當，遠優于國內同類產品。 繼續在市場調研的基礎上，再進行 11 種改類試劑盒的研發和生 產，填補國內外市場空白。 本項目完成后，實施單位將可生產 12 種診斷血清試劑盒（包括 前期已完成開發的 3 種），按每個疾控中心每年需求每種試劑盒一套 計算，總需求量約 1200 套。此外，進出口檢驗檢疫單位對某些種類 的血清亦有一定需求，約為 300 套。按每套試劑盒平均 1 萬元的售價 計算，每年的市場可達 1500 萬元。 免疫磁珠分離試劑盒可廣泛應用于臨床檢驗，食品檢驗，水質／ 環境檢驗，獸藥檢驗等，市場非常之大，現主要的生產商為國外的 Dynal 和 Matrix 公司，以 Dynal 公司為例，其每年可創造數十億美元 的銷售額。由于依賴進口，國內多家疾病預防控制和出入境檢驗檢疫 單位已經向項目實施單位提出了產品的開發意向。該產品研發成本約 為每毫升 600 元，銷售價格在每毫升 2000 元左右，顯示了良好的市 場前景。

利用現代分子生物學方法對傳統抗血清制備技術進行改造，突破了過去抗血清生產經驗為主造成的不確定性和不系統性，提高了抗血清制備的技術含量和生產效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體，從而實現抗體制備的標準化和規模化生產，同時也降低了生產成本。 免疫磁珠分離技術的最突出的優點是特異性強，可以明顯提高檢測的靈敏性，縮短病原體的檢測時間一至數天，并且可從復雜的樣品中直接分離病原體，降低標本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產出3種診斷血清產品，包括“致病性大腸桿菌O抗原診斷血清試劑

該儀器是我們自主研發的具有完全知識產權的一款新產品，適用于生物化學發光、免疫發光分析等研究工作，能夠自動檢測任何標準96 微孔板。產品可應用于醫院臨床檢驗、試劑公司生化發光試劑盒測試、高校院所生物醫學研究和實驗教學、質量檢驗檢疫部門樣品檢測等，具有廣闊的應用市場。 產品特點： 儀器所用試劑是開放的，可應用任何一家公司的試劑來檢測； 可實現全部微孔檢測或者任選微孔檢測，檢測方式十分靈活； 使用高靈敏光電器件，噪音低、靈敏度高，可達10-18mol ATP/孔； 動態范圍大，跨度可達8 個數量級； 可選配精準可靠的自動加液、沖洗模塊； 對各種酶標板，如平底板、圓底板、錐形底板等都能得到準確的結果； 分析軟件功能全面，既可以提供原始發光值、也可以通過輸入校準參數提供最終樣品濃度含量，還為試劑開發提供發光動力學分析等功能； 建有后臺數據庫，可存放EXCEL 格式數據，也可以存儲檢測報告照片； 具有獨特的光阱系統，防止光信號交叉干擾。

"該儀器是我們自主研發的具有完全知識產權的一款新產品，適用于生物化學發光、免疫發光分析等研究工作，能夠自動檢測任何標準96 微孔板。產品可應用于醫院臨床檢驗、公司試劑盒研發測試、高校院所生物醫學研究和實驗教學、質量檢驗檢疫部門樣品檢測等，具有廣闊的市場前景。產品特點：1. 儀器所用試劑是開放的，可應用任何一家公司的試劑來檢測；2. 可實現全部微孔檢測或者任選微孔檢測，檢測方式十分靈活；3. 配套相關試劑，可實現肝炎、心梗、腫瘤等重大疾病標志物的高靈敏檢測，靈敏度接近進口大型生化分析儀；4.可任選自發熒光模塊或激發熒光模塊，能夠自動檢測標準96孔板，可任選孔檢測；5.具有獨特的光阱系統，防止光信號交叉干擾。6.可選配精準可靠的自動加液、沖洗模塊；7.已完成原理樣機，可靠運行幾千次。8.建有后臺數據庫，可存放EXCEL 格式數據，也可以存儲檢測報告照片。可應用于醫院臨床檢驗、試劑公司生化發光試劑盒測試、高校院所生物醫學研究和實驗教學、質量檢驗檢疫部門樣品檢測。 "

研發階段/n本成果所制備的金霉素抗體對金霉素具有很高的特異性，可對動物源食品中金霉素的殘留量進行專一檢測和判定。樣品處理不需要過柱凈化，處理步驟簡單、實用，特別適合基層檢驗檢疫單位使用。樣品處理較現有儀器簡單、靈敏、省時。本成果經過靈敏度、精密度、特異性等質控項目測定各項指標達到國家相關技術要求。技術水平：專利技術（國家發明專利授權號：ZL2005100863473）應用前景：本成果用于對金霉素殘留的檢測具有良好的應用前景，可以在較短時間內檢測大量樣品，排除大量陰性樣品，同時樣品處理既簡單、省時、省

"團隊通過自主知識產權的專利技術首次誘導了能夠特異性識別高危型HPV病毒的特異性抗體。基于該抗體，團隊研發了高危型HPV免疫診斷試劑盒，通過膠體金試紙和ELISA試劑盒檢測受試者的宮頸分泌物，從而快速便捷的判斷受試者是否感染高危型HPV。 團隊已開發了以10C9為代表的一系列特異性識別高危型HPV的單克隆抗體，具有極高的靈敏度與特異性。基于這一序列的特異性抗體，完成了高危型HPV特異性抗體的研制，并組裝成試劑盒，目前正在進行臨樣本檢測和靈敏度優。 該技術目前國際上無同類產品，屬于國際原始創新。研究成果已經申請了1項國內專利和兩項國際專利，在基于免疫的快速診斷高危HPV感染上具有革命性突破。"