成果以臨床上多發的三種病原-經典豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）和豬格拉瑟氏菌（GPS）為研究對象，已初步組裝出CSFV、PRV和GPS的重組酶介導的等溫擴增（RAA）快速檢測試劑盒，可以滿足臨床上早期、快速診斷以及基層和現場即時檢測的實際需求，解決了常用診斷方法操作復雜、耗時長、對儀器設備要求較高等不足。且組裝出的CSFV、PRV-RAA檢測試劑盒，并已用于規模化養豬場斷奶仔豬以上兩種病原感染情況的調查。

01檢測CSFV的RAA引物對和探針組合及試劑盒

本項目針對CSFV毒株的高度保守區域設計引物和exo探針，組裝了CSFV real-time RAA檢測試劑盒。該試劑盒特異性好，與其他重要的豬病原體無交叉反應；最低可檢測到2個半數組織培養感染劑量（TCID50）的CSFV RNA/反應，批內和批間試驗變異系數均小于8.0%，重復性好。對135份臨床樣品進行檢測，real-time RT-RAA和TaqMan real-time RT-PCR的符合率為98.52%（133/135）。

02檢測PRV的RAA引物對和探針組合及試劑盒

本項目針對PRV毒株的gE基因高度保守區域設計引物和exo探針，組裝了PRV real-time RAA檢測試劑盒。該試劑盒特異性好，與其他重要的豬病原體無交叉反應；最低可檢測到3個TCID50的PRV DNA/反應，批內和批間試驗變異系數均小于9.0%，重復性好。對206份臨床樣品進行檢測，real-time RAA和TaqMan real-time PCR的符合率為97.57%（201/206）。

03檢測GPS的RAA引物對和探針組合及試劑盒

本項目針對GPS毒株的infB基因高度保守區域設計引物和exo探針，組裝了GPS real-time RAA檢測試劑盒。該試劑盒特異性好，與其他重要的豬病原體無交叉反應；最低可檢測到67 copies/反應，批內和批間試驗變異系數均小于9.0%，重復性好。對108份臨床樣品進行檢測，real-time RAA和TaqMan real-time PCR的符合率為100%（108/108）。

為了解全國規模化豬場CSFV、PRV在斷奶仔豬群中的感染情況，利用本項目所組裝的RAA試劑盒對來自全國21個省（自治區）的352個豬場的2034份斷奶仔豬血清樣本進行了檢測，為豬場相關疫病的防控提供了參考。本項目的豬偽狂犬病病毒、經典豬瘟病毒和豬格拉瑟氏菌的RAA試劑盒只需在42℃恒溫條件下反應30min即可完成，且整個反應過程對儀器設備要求低，耗時短，操作簡單，擴增所得產物可以通過便攜式藍光儀進行肉眼可視化的結果判斷，適用于基層現場診斷和即時檢測等方面，可以真正實現便攜式快速核酸檢測，可為以上三種病原的診斷、防控和區域凈化提供技術支持。